中性、石灰性土壤有效磷的测定方法和注意事项
作者：栾桂云
来源：《河南农业·综合版》 2013年第21期
河南省土壤肥料站 栾桂云
对土壤中有效磷含量的准确测定有助于改善土壤肥力及农作物的配置，同时对环境监测、环境保护等也具有重大意义。土壤有效磷含量也被作为评价土壤肥力的重要指标之一，也是测土配方施肥技术中的常规项目之一。对于中性、石灰性土壤有效磷的测定，目前国内外普遍采用Olsen法，此法优点甚为显著，但此法尚存在一定的限制因素，如测定结果随浸提温度的升高而增高、分析过程较繁琐、对土液比例、振荡时间及频率的要求严格等问题，造成测土分析速度慢，费工费时。为进一步提高工作效率，提高测定的准确性，减轻劳动量，现将工作中的经验做以小结，以期为测土配方施肥提供指导。
一、中性、石灰性土壤中有效磷的测定方法
（一）方法原理
石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷，一般用
0.5mol/LNaHCO3浸提，由于该浸提液提高了CO32-离子的活性，使其与Ca2+形成CaCO3沉淀，从而降低了Ca2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P被浸出，同时也可使活性较大的Fe-P 和AI-P通过水解作用而浸出，从而增加了碳酸氢钠提取中性和石灰性土壤有效磷的能力。由于浸出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀，浸提液中的磷可用钼锑抗比色法测定。
（二）试剂及其配制
1、氢氧化钠：10%(m/V)溶液。
2、碳酸氢钠浸提剂［c(NaHCO3)=0.50mol·L-1，pH=8.5］称取42.0gNaHCO3溶于950mL水中，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至8.5(用酸度计测定)，用水稀释至1L。贮存于塑料瓶中备用。如贮存期超过20d，使用时须重新校正pH值。
3、酒石酸锑钾［K(SbO)C4H4O6·1/2H2O］：0.30%(m/V)溶液。
4、钼锑贮备液：取10.0g钼酸铵溶于约60℃的300mL水中，冷却。另量取181mL浓硫酸，缓缓倒入约400mL水中，搅拌，冷却。然后将配制好的硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。再加入100mL酒石酸锑钾溶液，冷却后，加水定容至2L，摇匀，贮于棕色试剂瓶中备用。
5、 显色剂：称取0.5g抗坏血酸溶于100mL钼锑贮备液中。此溶液有效期不长，建议现用现配。
6、磷标准贮备溶液［c（P）=100μg ·mL-1］：称取105℃烘干 2h的磷酸二氢钾（优级纯）0.4390g，用水溶解后，加入5mL浓硫酸 （防长霉菌,可使溶液长期保存），转入1L容量瓶中，用水定容。此贮备溶液在冰箱中可长期保存。
7、磷标准工作溶液［c（P）=5μg ·mL-1］：吸取5.00mL磷标准贮备液于100mL容量瓶中，加水定容。此工作溶液不宜久存。
（三）操作步骤
1、有效磷的浸提:称取过2mm筛的风干土2.50g 置于200mL塑料瓶，加入温度为（25+1）℃的碳酸氢钠浸提剂50.0mL，盖紧瓶盖，摇匀，在（25+1）℃条件下振荡30min （振荡频率180r/min20r/min） ，取出立即用滤纸干过滤于50mL塑料烧杯中（弃去最初滤液，若滤液混浊要重新过滤）。同时做空白试验。
2、标准曲线的绘制:吸取5μg ·mL-1 P标准溶液（0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00）mL于25mL容量瓶中，加入碳酸氢钠浸提剂10.00mL，缓慢加入钼锑抗显色剂5.00mL，慢慢摇动，排出CO2后加水定容, 即得含磷（0.00，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00）μg/mL的磷标准系列溶液。在室温高于20℃条件下静置30min后，用1cm光径比色皿在波长880nm处（此波长处对有机质颜色已基本无吸收，不加活性碳，简化了操作步骤，有利于提高工作效率）。以标准曲线的零点调零后进行比色，测量吸光度，绘制标准曲线。
3、 测定:吸取滤液 10.00mL（含P约1~40μg）于干燥的50mL锥形瓶中（含磷量较高时，应减少浸提液的吸取量,并补加浸提剂至10mL后显色，以保持显色时溶液的酸度。计算时按所取浸提液的分取倍数计算），缓慢加入5.00mL显色剂，慢慢摇动，排出CO2。再加入10.00mL水，充分摇匀，逐净CO2。在室温高于20℃ 的条件下静置30min，按上述标准曲线分析步骤、条件进行比色，测量吸光度。
（四）结果计算
土壤样品中有效磷（P）含量，以质量分数ω计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算:
式中：ρ—从标准曲线求得的显色液中磷的浓度，单位为毫克每
升（mg/L）；
ρ0 —从标准曲线求得的空白试样中磷的浓度，单位为毫克每
升（mg/L）；
V —显色液体积，mL；
D —分取倍数，试样浸提剂体积与分取体积之比；
M —试样质量，g。
1 000 —将mL换算成L和将g换算成kg的系数。
平行测定结果以算术平均值表示，保留小数点后1位。
二、 注意事项
（一）所用的仪器必须合格
使用时要经过校准，按说明书或仪器操作规程要求使用。
1、电子天平。使用前，一定要校准后再用。否则，称取的试剂及样品不准确。
2、紫外分光光度计要稳定后再测定。并且光路要对正，检查方法是可先在比色槽内不放比色皿，检查其吸光度是否一致，不一致的要进行调整。
3、要使用经过配对的1cm光径比色皿。
4、仪器要按说明书要求使用。如天平、分光光度计先预热30min再使用，纯水机开后、关前要先冲5min等。
（二）所用的试剂要合格
1、配制试剂的纯水要合格。纯水机使用一段后，若发现水质发黄、混浊、白色泡沫过多，一定要及时更换滤心，生产出合格纯水（配制好的钼锑贮备液正常是无色的，若有浅黄色或浅黄绿色，可能是水质存在的问题较大，要更换一级纯水重新配制）。
2、所用的试剂要合格。检测人员要注意观察测定所用的试剂的质量，如外观颜色、溶解情况、溶液的颜色等，若发现异常，要查找原因。选用优质合适的试剂。如本实验中的钼酸铵试剂，合格的钼酸铵试剂外观看应无色或浅黄绿色单斜结晶，显色后溶液的颜色为天蓝色，肉眼看蓝色发亮，标曲的相关系数极易达到0.999以上；而使用纯度不高的钼酸铵显色后的溶液颜色为灰蓝色，肉眼看蓝色发暗，标曲的相关系数极难达到0.999。
（三）所用的器皿要干净、干燥
1、塑料瓶、瓶盖、塑料杯要用自来水反复冲洗，再用纯水冲洗干净，烘干后使用。切记不要用洗衣粉、去污粉等含磷的洗涤剂清洗瓶子。
2、锥形瓶或三角瓶，使用前可用1+10的硫酸浸泡2h，或用不含磷酸盐的洗涤剂刷洗，再先后用自来水、纯水冲洗干净，控干备用。使用后将废液倒出，用自来水冲洗后浸泡入纯水中以备用。建议在使用前20min控干，以防污染。
3、比色皿，每1次往比色皿中倒入显色液时，要先用纯水冲刷几遍，后用待测液洗2~3遍。一般先测颜色浅的，倒显色液于皿中容积2/3处，外面用擦镜纸吸干并擦拭干净，比色结束后将比色皿洗净再浸入盛有纯水的烧杯中。长期不用时，洗净、淋干放回比色盒，用前再用稀酸溶液和纯水浸洗干净。比色皿用后可用温热的（40~50℃ ）的2%的碳酸钠浸泡后洗净，以除去吸附的磷钼蓝显色物，必要时可用稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻后洗净。
（四）试剂配制要精准，称取、吸取等操作要准确
1、要严格土液比、浸提温度、振荡频率及振荡时间，严格按操作步骤进行。
2、用标准系列的零浓度调节仪器零点，做校准曲线测定样品。
3、检测人员在称取、吸取溶液、试剂时要准确，而且在转移过程中也不能损失。在吸取时不能污染或互相污染。要求每次使用后都要清洗干净，并且按操作先后顺序进行。
4、每次测定均需做标准曲线、空白试验、平行试验、带1个参比样（或标准样），以监测结果的准确性（平行测定结果允许差同Olsen法），不准确的要查找原因，重做。
5、显色液的颜色在8h内可保持稳定，所以建议当天显色，当天比色。
中性、石灰性土壤有效磷的测定方法和注意事项
