缺氧通过微小RNA-155和cyclin D1抑制滋养细胞迁移
薛平平;李玉静;戴毅敏;邱智华;沈莉;刁振宇;颜桂军;胡娅莉
【期刊名称】《中华围产医学杂志》 【年(卷),期】2015(018)003
【摘要】目的 探讨缺氧对人绒毛外滋养细胞微小RNA(microRNA,miRNA)-155表达的影响及其对滋养细胞迁移的影响. 方法 (1)采用100μmol/L氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)诱导HTR-8/SVneo细胞缺氧,实时定量聚合酶链反应技术检测miRNA-155的表达,蛋白质印迹技术检测JunB和FosB蛋白的表达,划痕实验评估细胞迁移能力.(2)采用SP600125和PDTC分别抑制激活蛋白-1(active protein-1,AP-1)和/或核因子(nuclear factor)-κ B通路,实时定量聚合酶链反应技术检测miRNA-155的表达变化.(3)HTR-8/SVneo细胞瞬时转染pEGFP-miRNA-155、pEGFP-C1和pGL3-pro-cyclin D1 3'UTR,荧光素酶报告基因系统检测miRNA-155对cyclin D1 3'非编码区的调控.(4)HTR-8/SVneo细胞瞬时转染pEGFP-miRNA-155和/或pFLAG-CMV-cyclin D1以过表达miRNA-155和/或cyclin D1,划痕实验评估细胞迁移能力的改变.采用两独立样本t检验,方差分析及LSD检验进行统计学分析. 结果 (1) 100 μmol/L CoCl2培养HTR-8/SVneo细胞24和48 h,miRNA-155的相对表达量分别是0h的(1.40±0.28)倍(t=3.302,P＝0.030)和(1.74±0.14)倍(t=8.578,P=0.001),随CoC12(100μmol/L)作用于HTR-8/SVneo细胞的时间延长,JunB和FosB蛋白表达均升高.细胞迁移率在培养12、24和48 h较0μmol/L CoC12时下降,尤以48 h降低明显[(52.98±3.77)％与(64.68±3.92)％,t=5.259,P=0.00 0].(2)抑制AP-1亚组、抑制NF-κB亚组及同时抑制AP-1和NF-κB亚组miRNA-
缺氧通过微小RNA-155和cyclin D1抑制滋养细胞迁移
