发酵液中还原糖测定

发酵过程中的还原糖测定

[实验目的]

1、学习和掌握发酵过程中的取样操作。

2、了解还原糖的各种测定方法；掌握DNS法测定的操作方法及注意事项。 [实验原理]

（一）发酵过程中的取样操作

取样操作是发酵过程中在线控制的重要内容；只有通过取样才能对发酵过程中的诸多参数进行测定，以求进一步的控制。

操作要注意动作协调、快速，不能造成发酵罐的污染，严格按照相应程序进行。盛放样品的器皿也要洁净、无菌，以防止对测定结果产生影响。

（二）发酵过程中的还原糖测定

单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖。而多糖和蔗糖等属于非还原性糖；利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。

发酵工艺控制是通过一系列工艺参数来实现的。这些参数中包括物理参数，即温度、压力等。二是化学控制系数，即pH、糖的浓度等；其中糖的浓度是控制发酵过程中的重要参数之一。由于碳源对于发酵过程菌体生长及产物合成都有较大影响。因此，测知发酵过程中还原糖浓度变化，对发酵控制有重要的指导意义。

还原糖的测定方法有很多，一般有菲林试剂法、酶法和DNS法。 A、菲林试剂法

菲林试剂由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu2O沉淀，醛基则被氧化为羧基。

利用菲林溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的菲林溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基沉还原为无色，以示终点。根据样品消耗量求得总糖或还原糖的含量。

用菲林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。

B、酶法

又称葡萄糖氧化酶－过氧化物酶法。葡萄糖氧化酶可将葡萄糖氧化成葡萄糖酸并产生过