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华中科技大学同济医学院考博分子生物学（专业基础）简答题历年试题汇总
1.顺式作用元件有哪些，并加以解释。2015，2012考 2.人类基因组计划的4张图，各自的意义是什么？ 3.癌基因激活的主要途径？
问答：1.什么是基因治疗，基因治疗的主要策略是什么？基因治疗的技术及主要内容，2015，2014，2013考
问答2.蛋白质组学的主要技术有哪些并解释？2015，2012考 2014简问答题
1. PCR原理，步骤，写出6种PCR衍生技术 2013，2014，2009考 2. 何谓基因克隆？简述其基本过程。09年 3.重组DNA技术，问答题20分，14年考
4.举例说明基因表达的调控机制。题目太大，原核调控，真核调控？13年 问答5.人类基因定位的常用方法及原理。12年，09年考 简问6.简述反式作用因子的结构特点及作用方式 09年 简问7.简述逆转录病毒的结构特点 09年考
问答：真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么？根据他们的结构特征可以分为哪些类型？它们和DNA相互识别的原理是什么？2013年考 问答：试述大肠杆菌中表达蛋白质产物的步骤。 2013年考 试比较克隆载体、原核载体和真核载体的特点 2012年考
2016年真题
英译中名词解释（20分）
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反义RNA； 操纵子 ；限制性核酸内切酶； 选择性剪切； 抑癌基因； 基因诊断； RNA干扰 ；质粒； gene maping； 管家基因 简答题。
真核基因组的结构和功能特点20分 人类基因组的结构特征15分 原癌基因的特点15分
蛋白质组研究常用技术有那些，简介其作用。15分 当前 基因治疗技术面临的技术问题有哪些？15分
以下为2001-2004年试题及网上答案
一、若要获得IL-2的基因工程产品，你应该怎么做？ 基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作，又叫分子克隆，DNA重组技术。
1. 在GENBANK中检索IL-2的mRNA序列；在genecard里检索IL-2高表达的组织；同时检索一下有关文献；
2. 如果考虑使用原核表达系统（通常是大肠杆菌表达系统），将IL-2的成熟肽的基因序列找出（呵呵，我没有检索，不清楚是否有信号肽）进行分析；
3. 根据表达载体，设计含有合适酶切位点的、对应成熟肽编码区的引物；
4. 提取IL-2高表达的组织的mRNA，RT-PCR，T载体克隆或直接酶切克隆至表达载体中、测序。
二、试述反式作用因子的结构特征及作用方式(20分) .
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Trans-acting factor是一类细胞核内的蛋白质因子，能够与顺式作用元件和RNA-pol相互作用，调节基因转录活性。一般含有DNA结合结构域和转录活化结构域。
DNA结合结构域：（1） Helix-turn-helix 含有3个helix，其中helix3与DNA识别结合，helix1和helix2与其它蛋白质结合。（2）Zenic finger锌指结构：由相对保守的一段氨基酸序列和锌离子结合，形成相对独立的功能域，像一根手指插入DNA的大沟。两种类型的DNA结合蛋白有这样的模序，一是锌指蛋白，另一个是甾体受体。（3）Leucine Zipper：亮氨酸拉链，两个蛋白质之间相互作用，共同建立一个转录复合体。是一种富含亮氨酸的蛋白质形成的二聚体motif。这种motif可以识别特殊的DNA序列。两个亮氨酸拉链区的反式作用因子依靠疏水力量相互结合，N-端有碱性氨基酸构成的a-helix能够与DNA结合。Eg: AP1与SV40增强子的结合（4）helix-loop-helix: 兼性a-helix具有疏水面和亲水面，两个具有这种的motif反式因子可以形成dimer。仅靠helix的N-端有一段富含碱性氨基酸的序列可以与DNA结合。HLH以同二聚体或者异二聚体作用于顺式作用元件。（5）同源异形结构域homeodomain,同源异性盒是一种编码60aa的序列，长180bp，几乎存在于所有真核生物中。
转录激活域：与其他转录因子相互作用的结构成分。常见的转录激活结构域有富含谷氨酰胺结构域，富含脯氨酸结构域及酸性α螺旋结构域。 三、试述2型限制酶的功能与特性(20分) Ⅱ 型酶相对来说最简单，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或附近切割 DNA ，产生带 3'- 羟基和 5'- 磷酸基团的 DNA 产物，需 Mg2+ 的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM 。识别序列主要为 4-6bp ，或更长且呈二重对称的特殊序列，但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异，有些是隔开的。 ① 有特异识别和切割的序列部位
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② DNA分子上两个单链断裂的部位通常不是直接相对的
③ 断裂所形成的DNA片段常具有碱基互补的单链尾巴（粘性末端）
④ 内切酶的切割和修饰功能由两个不同的酶催化所完成，即内切酶活性和甲基化作用活性是分开的
四、试述影响原核基因转录的因素(20分) 原核基因表达调控与真核存在很多共同之处，但因原核生物没有细胞核和亚细胞结构，其基因组结构要比真核生物简单，基因表达的调控因此而比较简单。虽然原核基因的表达也受转录起始、转录终止、翻译调控及RNA、蛋白质的稳定性等多级调控，但其表达开、关的关键机制主要发生在转录起始。其特点包括以下3方面：（1）σ因子决定RNA聚合酶的识别特异性：原核生物只有一种RNA聚合酶，核心酶催化转录的延长， 亚基识别特异启动序列，即不同的 因子协助启动不同基因的转录。（2）操纵子模型的普遍性：除个别基因外，原核生物绝大数基因按功能相关性成簇地连续排列在染色体上，共同组成一个转录单位即操纵子，如乳糖操纵子等。一个操纵子含一个启动序列及数个编码基因。在同一个启动序列控制下，转录出多顺反子mRNA。（3）阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性：在很多原核操纵子系统，特异的阻遏蛋白是控制启动序列活性的重要因素。当阻遏蛋白与操纵基因结合或解离时，结构基因的转录被阻遏或去阻遏。原核生物在细胞质内转录，转录和翻译同时进行。 五、试述病毒核酸的结构特点(10分) （1）病毒内的核酸结构相对简单，其遗传物质可以是DNA或者RNA，也有阮粒病毒以蛋白质作为遗传物质，成熟的病毒内只有一种遗传物质，要么是DNA，要么是RNA。（2）病毒基因可以连续也可以中断，很少有重复序列。病毒基因组大部分是用来编码蛋白质的，其编码区大于90%。非编码区较少。非编码区通常是基因表达的调控区（3）有重叠基因存在，使得较小的基因片段可以携带较多的遗传信息。（4）病毒基因组是单倍体，功能相关的蛋白质基因常
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常丛集于基因组的一个或者多个特定部位，形成一个功能单元或者转录单元。
六、真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么？根据它们的结构特征可以分为哪些类型？它们和DNA相互识别的原理是什么？
特异性转录调控因子是指是除基本转录因子之外，与转录核心区以外的顺式作用元件相结合，影响基因转录的因子，分为DNA结合结构域和转录激活结构域。与GGGCGG结合的特异性转录调控因子叫Sp1。与CCAAT结合的转录因子叫CBF。大多数类固醇激素与受体结合之后，构成特异性转录因子，与顺式作用元件结合，激活基因转录。也有转录调控抑制因子，可以覆盖转录活化区，覆盖转录起始区。还有HSP。与DNA的识别模式有：(1)螺旋-转角-螺旋，helix3识别结合DNA，helix1,helix2结合其它蛋白质因子。(2)Zenic finger与DNA大沟相结合，可以与RNA-pol3及其它转录因子相互作用。(3)亮氨酸拉链： N-末端由碱性氨基酸构成的a-helix可以与DNA相结合. (4)helix-loop-helix 兼性a-helix具有疏水侧面和亲水侧面，两个具有这种motif的反式因子可以形成dimer。紧靠helix N-末端的碱性氨基酸组成的序列可以结合DNA。 转录因子的DNA结合区都有特定的空间构型和带电性质。可以和结构和电荷量相匹配的DNA结合。 七、简述细胞内癌基因激活的方式？ (1) 点突变：基因中单个碱基替换，引起表达的蛋白质氨基酸序列改变。例如，结肠癌中常有k-ras基因的点突变。(2) 插入启动子：多见于癌症的起始阶段。某些病毒(ALV)的长末端重复序列(LTR)含有启动子，转染宿主细胞之后，插入到原癌基因周围或内部，启动基因转录，活化。例如ALV的LTR插入到c-myc周围，可以使其表达水平提高20-76倍。(3)基因扩增：见于癌症进展期。癌基因不断复制，拷贝数增多。在染色质中有浅染区，均质染色质。其不断复制扩增，可以脱离染色体，形成双微体。例如，在小细胞肺癌中，c-myc扩增，胶质瘤中ERBB1扩增，神经纤维瘤中，n-myc扩增。(4) 染色体易位和重排：染色体易位时，
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考博分子生物学历年真题汇总
