实验三 青蒿药材中青蒿素的快速检测
【实验目的】
1．熟悉超声波提取药材中有效成分的基本操作。
2．了解超声波提取-紫外分光度法快速检测青蒿药材中青蒿素的方法。 【实验原理】
超声波是指频率为20千赫～50兆赫左右的电磁波，它是一种机械波，其能量是通过载体和介质进行传播的。超声波不能使样品内的分子产生极化，而是在溶剂和样品之间产生声波空化作用，导致溶液内气泡的形成、增长和爆破压缩，从而使固体样品分散，增大样品与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率。
超声波提取技术适用于中药材有效成份的萃取，是中药制药彻底改变传统的水煮醇沉萃取方法的新方法、新工艺。与水煮、醇沉工艺相比，超声波萃取具有如下突出特点：（1）革除高温，在常温常压萃取，安全性好，操作简单易行，维护保养方便。（2）具有广泛性，萃取效率高，能耗少。（3）药材原料处理量大，可成倍增加，杂质少，萃取工艺成本低。（4）有效成分易于分离、纯化。
青蒿素系列药物是当前治疗疟疾最安全有效的药物，因全球青蒿素使用量巨大，市场供不应求，一些不法商贩趁机利用劣质青蒿或伪品冒充正品出售，给青蒿素提取厂商造成了很大的损失。有必要研究一种简单、快速、准确的分析方法对青蒿药材的现场收购进行质量监控。常规的青蒿药材检测主要是重量法，但该方法检测繁琐费时，不适应现场快速检测。本实验以索氏提取-高效液相色谱法为对照，建立超声波提取-紫外分光度法进行现场快速检测青蒿素的方法。
青蒿素在紫外区203nm处有较弱的末端吸收，但与碱反应后，产生一化合物(Q292)，该物质在292nm处有最大吸收。
HOH3COHHOCH3OOOH3CHH3COHH3CH0.2%NaOH溶液50℃, 30min-OOHOCH3H青蒿素Q292
以空白溶液为参比，直接用超声波提取溶液，在292nm下测定吸光度A样品。将吸光度A样品代入公式（5-1）即得出样品的含量：
M（mg·g-1）=（A样品×V×2.2984）/（A标准×3） （5-1）
式中A
样品
为样品测得值，V为超声后样品石油醚的体积，A
标准
为0.1 mg·mL-1青
蒿素标准品吸光度,2.2984为索氏提取-高效液相色谱法与超声波提取-紫外分光度法的转换系数。
【实验仪器与试剂】
紫外分光光度仪，KQ2200B型超声波清洗器，0.01g天平，具塞150mL锥型瓶，具塞10mL刻度试管，25mL和50mL量筒，电炉，恒温水浴箱，0.22μm水性滤膜，10mL一次性注射器，300μL加样枪，1mL吸头，粉碎机，60目和80目筛
青蒿素标准品，青蒿药材，30℃～60℃石油醚(AR)，甲醇(AR)，95%乙醇溶液，0.2%NaOH溶液
【实验操作】
1．青蒿素对照品溶液的配制
精密称取10mg青蒿素标准品，用95%乙醇溶液使其溶解，移至10mL容量瓶中，用95%乙醇溶液稀释至刻度，混匀，即1mg·mL-1的青蒿素对照品溶液，作为贮备液。
2．青蒿素标准溶液的配制
吸取贮备液1mL于10mL刻度试管中，混匀，即得0.1 mg·mL-1标准溶液。 3．2%NaOH溶液的配制
精密称量1g NaOH于500mL试剂瓶中，加入500mL蒸馏水溶解，混匀，室温保存。
4．空白、标准、供试品溶液的配制
1） 空白溶液的配制：取3mL95%乙醇溶液于10mL刻度试管中，用0.2%NaOH溶液稀释至刻度，混匀，即得空白溶液。
2) 供试品溶液的制备：取青蒿放入粉碎机粉碎，分别过80目筛和60目筛，得到60目～80目青蒿粉，称取0.5g±0.01g青蒿样品（60目～80目）于150mL具塞锥形瓶中，加入15mL石油醚（30℃～60℃），超声15min；超声后将石油醚溶液倒入量筒，记录石油醚体积V；分别取量筒中0.3mL石油醚溶液于3个10mL
刻度试管中,放入沸水中挥干。
5．青蒿素的衍生化
1）在上述挥干的试管中，各加3mL95%乙醇，使残渣溶解，用0.2%NaOH溶液定容到10mL，混匀，50℃水浴30min。
2）空白溶液的衍生：取空白溶液，50℃水浴30min。
3）标准溶液的衍生：取1mL 0.1mg/mL标准溶液，置于10mL试管中，加2mL95%乙醇溶液，0.2％NaOH溶液定容到10mL，混匀，50℃±1℃水浴30min。
上述衍生后，冷却至室温，用0.22μm滤膜过滤，滤液，以紫外分光光度计测定吸光度。
6.青蒿素的检测
以空白溶液为参比，在检测波长292nm处，测定分别测定青蒿素标准品溶液和供试品溶液吸光度A标准和A样品，代入公式（5-1）计算样品中青蒿素的含量。
【思考题】
1．超声波提取技术有什么特点？
2．青蒿药材快速检测青蒿素方法有何特点？还有没有更快的检测方法？
实验三 青蒿药材中青蒿素的快速检测-3
