(完整版)SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方

SDS-PAGE

1、 SDS-PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳

2、 Acr：丙烯酰胺；配胶时用30?r（质量比Acr：Bis=29:1） 3、 Bis：甲叉双丙烯酰胺 4、 DDW：超轻水

5、 SDS：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用10%） 6、 APS：过硫酸铵NH4S2O4配胶时用10% 7、 TEMED：四甲基乙二胺，促凝剂

8、 Tris-Hcl：3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶ph=8.8，浓缩胶ph=6.8） 9、 DTT：二硫苏糖醇，DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的

半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 10、

IMA：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷

基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。 CH>2ICONH>2，是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制SH酶类的物质。

1) 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的

分离胶(即下层胶)：

SDS-PAGE分离胶浓度 6%胶 8%胶 10%胶 12%胶 15%胶

最佳分离范围 50-150kD 30-90kD 20-80kD 12-60kD 10-40kD 成分 6%胶 蒸馏水 1M Tris,pH8.8 10%SDS 10%过硫酸铵 TEMED 成分 8%胶 蒸馏水 1M Tris,pH8.8 10%SDS 10%过硫酸铵 TEMED 成分 10%胶 蒸馏水 1M Tris,pH8.8 10%SDS 10%过硫酸铵 TEMED 成分 12%胶 蒸馏水 1M Tris,pH8.8 10%SDS 10%过硫酸铵 TEMED 成分 15%胶 蒸馏水 1M Tris,pH8.8 10%SDS 10%过硫酸铵 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升） 5 2.0 1.9 0.05 0.05 0.004 5 1.7 1.9 0.05 0.05 0.003 5 1.3 1.9 0.05 0.05 0.002 5 1.0 1.9 0.05 0.05 0.002 5 0.5 1.9 0.05 0.05 10 4.0 2.0 3.8 0.1 0.1 0.008 10 3.3 2.7 3.8 0.1 0.1 0.006 10 2.7 3.3 3.8 0.1 0.1 0.004 10 2.0 4.0 3.8 0.1 0.1 0.004 10 1.0 5.0 3.8 0.1 0.1 15 6.0 3.0 5.7 0.15 0.15 0.012 15 5.0 4.0 5.7 0.15 0.15 0.009 15 4.0 5.0 5.7 0.15 0.15 0.006 15 3.0 6.0 5.7 0.15 0.15 0.006 15 1.5 7.5 5.7 0.15 0.15 20 8.0 4.0 7.6 0.2 0.2 0.016 20 6.7 5.3 7.6 0.2 0.2 0.012 20 5.3 6.7 7.6 0.2 0.2 0.008 20 4.0 8.0 7.6 0.2 0.2 0.008 20 2.0 10.0 7.6 0.2 0.2 30 12.0 6.0 11.4 0.3 0.3 0.024 30 10.0 8.0 11.4 0.3 0.3 0.018 30 8.0 10.0 11.4 0.3 0.3 0.012 30 6.0 12.0 11.4 0.3 0.3 0.012 30 3.0 15.0 11.4 0.3 0.3 50 20.0 10.0 19.0 0.5 0.5 0.04 50 16.7 13.3 19.0 0.5 0.5 0.03 50 13.3 16.7 19.0 0.5 0.5 0.02 50 10.0 20.0 19.0 0.5 0.5 0.02 50 5.0 25.0 19.0 0.5 0.5 30?r-Bis(29:1) 1.0 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升） 30?r-Bis(29:1) 1.3 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升） 30?r-Bis(29:1) 1.7 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升） 30?r-Bis(29:1) 2.0 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升） 30?r-Bis(29:1) 2.5