4.2.2 再加1滴约3%—5%红细胞生理盐水悬液于试管中。混匀。 4.2.3 离心，速度和时间可选择以下二种之一：
转速1000rpm，时间一分钟1分钟或3400rpm，时间15秒。 4.2.4 检查是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，是细胞再悬浮起来。
4.2.5 观察凝集状况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜。 4.2.6 若是阴性结果，需在37℃孵育15分钟-30分钟，然后再离心观察结果。结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。 4.3 微量板法（U型板）
4.3.1 加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。
4.3.2 再在微孔中一滴约 3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。
4.3.3 用机械的方法将U型板混匀。
4.3.4 用板式离心机离心：2000rpm,时间 30 秒。不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。
4.3.5 检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）。 4.3.6 结果判断：用机械震荡U型板，再悬浮细胞，根据悬浮情况来判断凝集。阳性反应，出现红细胞凝集，而阴性反应在微孔中会出现均匀细胞悬液。
4.3.7 可用肉眼和自动化判读结果。
4.3.8 如果呈阴性，需要试管法重做一遍实验。
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5、参考值范围
阳性反应：出现红细胞凝集，为RhD阳性。 阴性反应：红细胞不出现凝集，为RhD阴性。
6、产品性能指标 抗D（IgM）效价大于等于1：64（ccDeeO型） 7、 方法的局限性
VI本实验不能凝集CategoryD 细胞，对于阴性和弱阳性结果，按有关安全输血规范进行确认实验，必要时送血型参比实验室进行确认。 8、注意事项
8.1 试剂含有0.1%W/V叠氮钠，如果摄入会中毒。
8.2 试剂如出现混浊则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知RhD阴性、RhD 阳性红细胞检查结果是否符合，以防制品污染、变质失效，而造成错误。及时贴上开封时间标签，在效期内使用。 8.3 由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
8.4 Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。 8.5 对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。 9、 操作性能概要 9.1 假阳性反应原因分析：
9.1.1 试剂中存在具有其他特异性的抗体（指不完全抗 D 抗体），因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份实验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验
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人员意识到有进一步实验的必要。
9.1.2 多凝集红细胞与任何人血清会发生凝集。
9.1.3 当用未经洗涤的细胞做实验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
9.14 试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。 9.2 假阴性反应原因分析：
9.2.1 搞错抗血清 每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。 9.2.2 试管中漏假抗血清 在加入细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。
9.2.3 某种特定的抗血清不能和其他相应抗原的变异型起反应。 9.2.4 如某种抗血清含有主要对抗 Rh 复合抗原的抗体，则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。这在抗C血清最为常见，因为很多抗C血清含有反应性更强的抗Ce成分。
9.2.5 未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞的比例以及温育的温度和时间不正确。
9.2.6 抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。 10、参考文献：
全国临床检验操作规程（第3版）
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抗体筛选和鉴定试验
1、 原理
红细胞血型抗体分子的物理特性与血清学的反应性之间有着直接的关系。可分为IgM和IgG球蛋白抗体 IgM 为天然抗体，在盐水介质中能直接相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应。 IgG为免疫抗体，常经妊娠或输血等免疫产生。在盐水介质中不能凝集而只能致敏抗原的红细胞，且必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝胶（或玻璃）等方法。 2、 方法
待检血清需要使用多种方法进行鉴定。一般使用盐水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝胶法检测抗体。在检测到弱抗体时，可以利用适当增加血清的细胞比例、适当增加孵育时间、加入低离子强度溶液增效剂或 PEG 聚氧乙烯乙二醇等方法增加反应的敏感性。不同的抗体在不同的方法和条件下可以有不同的表现。这些特性为判定抗体特异性提供了参考信息。 3、 试剂
3.1、 红细胞：选取三个以上的O型红细胞组成一组筛选细胞（已知抗原）。
3.2、谱细胞：选取八个以上的O型红细胞组成一组谱细胞（已知抗原）。 4、 操作
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4.1、 不规则抗体的筛选：用筛选细胞（1、2、3号），同患者血清在三种介质中（盐水、凝聚胺、看球蛋白）反应，需做自身细胞对照。 4.2、 不规则抗体的鉴定：对筛选阳性的患者应检查其抗体的特异性。用一组谱细胞（1-11）同患者血清在三种介质中（盐水、凝聚胺、抗球蛋白），进行抗体的筛选，需做自身细胞对照。 5、 结果判断
阳性反应：出现红细胞凝集。表示红细胞上有相应抗体存在。 阴性反应：出现红细胞不凝集。表示红细胞上没有相应抗体存在。 结合谱细胞反应格局，确定抗体特异性。 6、 临床意义 6.1、 定血型； 6.2、 测效价
6.3、 可能几率：正确的抗体鉴定，必须有充分的谱细胞支持。 7、 标本要求
7.1、按照一般的血液样本采集步骤采集血液标本。该标本可于4℃或0℃以下冷冻保存三周或数年。一般不需特殊处理。
7.2、 应用EDTA抗凝标本，可反应体内红细胞被补体致敏的真实情况。抗凝标本也用于直接抗球蛋白试验，并可提供洗脱技术所需的红细胞来源。
7.3、 需要一管新鲜收集的凝固的血液标本用作血清研究。若怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试验阳性，其血液标本凝固应保持在 37℃，直到血清被分离出来为之。
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输血科管理制度、程序性文件、SOP_文件
