小麦热激蛋白60(HSP60)基因的克隆与原核表达
李芳芳;刘国富;王媛媛;曹雪松
【期刊名称】《安徽农业科学》 【年(卷),期】2010(038)006
【摘要】[目的]构建小麦热激蛋白60基因的原核表达载体, 并在E.coli中进行高效表达.[方法]根据GenBank中收录的小麦热激蛋白60基因序列设计合成1对引物P1/P2,利用RT-PCR方法从小麦RNA中扩增小麦HSP60基因,应用基因重组技术构建pGEX-4T-1-HSP60表达载体,将构建好的小麦HSP60基因原核表达载体pGEX-4T-1-HSP60转化至大肠杆菌表达菌株E.coli-BL21感受态细胞.[结果]对重组质粒进行酶切分析及序列测定鉴定正确后,与GenBank中收录的小麦HSP60基因序列比对分析,同源性达100%.在IPTG诱导下获得了目的蛋白,所表达的GST-HSP60融合蛋白分子量约为90 KD.蛋白质电泳(SDS-PAGE)结果表明,表达的蛋白条带与预期的大小一致.[结论]成功构建了pGEX-4T-1-HSP60的原核表达载体,在E.coli-BL21中高效表达了HSP60蛋白,为进一步研究该蛋白的功能及其作用机制奠定了基础. 【总页数】3页(2803-2805)
【关键词】HSP60;基因克隆;原核表达 【作者】李芳芳;刘国富;王媛媛;曹雪松
【作者单位】聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059 【正文语种】中文
【中图分类】S512.1 【相关文献】
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小麦热激蛋白60(HSP60)基因的克隆与原核表达
