小鼠胰岛素受体β(ISR-β)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒利用说明书
本试剂仅供研究利用
目的：本试剂盒用于测小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰岛素受体β(ISR-β)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素受体β(ISR-β)水平。用纯化的小鼠胰岛素受体β(ISR-β)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素受体β(ISR-β)，再与HRP标记的胰岛素受体β(ISR-β)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素受体β(ISR-β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素受体β(ISR-β)浓度。 试剂盒组成：
试剂盒组成 说明书 封板膜 密封袋 酶标包被板 标准品：2700ng/L 标准品稀释液 酶标试剂 样品稀释液 显色剂A液 显色剂B液 终止液 浓缩洗涤液 注意事项：
48孔配置 1份 2片（48） 1个 1×48 ×1瓶 ×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3ml×1瓶 （20ml×20倍）×1瓶 96孔配置 1份 2片（96） 1个 1×96 ×1瓶 ×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6ml×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 1． 试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳15-30分钟后方可利用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保留。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不阻碍结果。 3． 各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差。一次加样时刻最好
操纵在5分钟内，如标本数量多，推荐利用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量太高（样本OD值
大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必然倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。 6． 底物请避光保留。
7． 严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准. 8． 所有样品，洗涤液和各类废弃物都应按传染物处置。 9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中别离加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl别离加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔别离加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl别离加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中别离加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl别离加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中别离加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中别离取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔别离加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度别离为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。 2.
加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 5.
配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 7. 8. 9.
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反映（现在蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止
液后15分钟之内进行。 样本处置及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清，保留进程中如显现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应依照标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清，保留进程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管搜集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清，保留进程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参如实行。
4. 细胞培育上清：检测分泌性的成份时，用无菌管搜集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清。保留进程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入必然量的PBS，。用液氮迅速冷冻保留备用。标本融化后仍然维持2-8℃的温度。加入必然量的PBS（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。假设不能马上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠胰岛素受体βISRβ酶联免疫分析ELISA
