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玉红膏对大鼠皮肤创面愈合修复中神经
肽P物质的影响
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
作者：黄清怡 孔繁飞 李莉 孔焕宇
【摘要】 ：目的 观察玉红膏对大鼠皮肤创面愈合修复中神经肽P物质(Substance P,SP)的影响,探讨玉红膏促进创面愈合修复的作用机理。方法 取144只大鼠于背部造成直径1.8 cm全层皮肤缺损模型,完全随机法分成3组,即玉红膏组、京万红组、模型组,另设正常对照组。于造模后第1、3、5、7、10、14、21、30天8个时间点进行创面愈合率、组织形态、SP免疫组化染色的观察和检测。结果 与模型组比较,玉红膏组的创面愈合率提高(P0.05),形态学显示创面中性粒细胞浸润较少,增生期新生血管、成纤维细胞和胶原纤维数量较多；创面中SP表达在创伤后3、5、7、10、14 d高于模型组(P0.01,P0.05)。结论 玉红膏有促进创面愈合的作用,机理与在增生期促进创面SP分泌有关。
【关键词】 玉红膏 创面愈合 神经肽P物质 大鼠
Abstract：Objective To observe the effect of Yuhong ointment on secretion of Substance P of promoting wound healing and
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explore its mechanism. Methods The whole layer skin defection rat was used and randomly divided into 3 groups：Yuhong ointment group, Jingwanhong group, model group, with normal rats as control. The condition of skin wound surface and healing time were observed and recorded at 1, 3, 5, 7, 10,14, 21, 30 day after wound. The expression of Substance P were measured and compared by immunohistochemistry staining. Results Average wound healing rate had no significant difference between Yuhong ointment group and Jingwanhong group, which were higher than model group (P0.05). The results of immunohistochemistry staining illustrate the Substance P secretion of Yuhonggao group was more than that of model group in the 3th, 5th, 7th, 10th, 14th day (P0.01, P0.05). Conclusion Yuhong ointment can accelerate skin wound healing and maybe related with promoting the secretion of Substance P of skin wound in the proliferation period.
Key words：Yuhong ointment；wound healing；Substance P；rat
近年研究表明,皮肤创伤愈合时,受损组织通过释放包括神经肽P物质(Substance P,SP)在内的介质,参与伤口愈合的调控。本实验利用免疫组化染色技术,观察SP在大鼠各组的表达差异,以探讨玉
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红膏促进皮肤创面愈合修复的部分机理。 1 实验材料 1.1 动物
清洁级健康Wistar雄性成年大鼠,体重180～210 g,中国中医科学院基础理论研究所实验动物中心提供,动物合格证号为SBSCXK(京)2002-2006。 1.2 主要药物、试剂及仪器
玉红膏,购自中国中医科学院广安门医院制剂中心,批号20020110；京万红,天津达仁堂达二药业有限公司产品,批号Z12020440。SP多克隆抗体,即用型SABC免疫组化试剂盒、lot50581654、DAB显色试剂盒、lot50281313均为北京中杉金桥生物工程有限公司产品。生物组织制动脱水机,天津爱华；Olympus光学显微镜；Image-Pro-Plus彩色病理图像分析系统。 2 实验方法 2.1 分组
将144只大鼠按完全随机法分成3组,即玉红膏组、京万红组、模型组,每组48只动物,另设6只为正常对照。 2.2 造模与给药
正常对照组常规饲养,不作任何处理,其余各组造模。大鼠致伤前1 d背部剃毛,24 h后腹腔注射0.3%戊巴比妥钠10 mL/kg麻醉,背部用75%酒精消毒后,在每只鼠背部剪3个直径1.8 cm的圆形全层皮肤缺损创面。玉红膏组造模后立即外敷玉红膏,每个创面0.1 g；京万
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红组造模后立即外敷京万红,每个创面0.1 g；2组均每日定时换药2次至创面愈合；模型组创面不予处理。使用无菌垫料单笼喂养。 2.3 取材和组织处理
于造模后第1、3、5、7、10、14、21、30天观察记录创面愈合情况并取材,每组每个时间点6只动物。大鼠在麻醉状态下,剪取创面皮缘约(2×2)cm2,取材后用4%多聚甲醛固定液固定,常规脱水,石蜡包埋,切片。按说明书操作步骤进行HE常规染色和SP的免疫组化染色,一抗效价1∶100,以PBS代替一抗作阴性对照。 2.4 检测指标与方法 2.4.1 创面愈合率
比较玉红膏组、京万红组、模型组间创面愈合率,创面愈合率＝(原始创面面积－未愈合创面面积)/原始创面面积×100%。 2.4.2 病理形态学观测
观察各组创面愈合过程中的病理形态学变化,比较玉红膏组与模型组的创面愈合特点。 2.4.3 免疫组化测定
用Olympus光学显微镜观察SP的表达情况,胞浆或间质棕黄色颗粒者为阳性表达,用Image- pro-plus图像分析系统分析软件,测定距创面中心0.6 cm范围内的真皮及表皮SP阳性面积。 2.5 统计学方法
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所有计量数据以x±s表示,采用SPSS13.0统计软件对组间计量资料进行方差分析。 3 结果
3.1 各组创面愈合率比较
(见表1)表1 各组大鼠不同时点全层皮肤缺损创面的创面愈合率比较(略)注：与模型组比较,*P0.05
3.2 玉红膏组与模型组HE形态学特点比较
与模型组比较,玉红膏组创面中性粒细胞浸润较少,可见在增生期,新生血管数量较多,与创面垂直生长,且管径较粗；成纤维细胞数量较多,胞体较大,胞浆突出明显,核仁染色较深,胶原纤维较多。重塑期胶原纤维排列比模型组有序。 3.3 各组神经肽P物质阳性表达比较
(见表2)表2 各组大鼠不同时点创面中SP阳性表达比较(略)注：与模型组比较,*P0.05,**P0.01；与京万红组比较,▲P0.05
4 讨论
现代医学认为,皮肤创面愈合过程通常分为炎症期、增生期和重塑期[1]。SP作为一种具有多方面生理学效应的神经肽,参与皮肤创面愈合的全过程［2］。脊髓和组织神经末梢以及皮肤的角质细胞、成纤维细胞、内皮细胞和肥大细胞等均能分泌释放神经肽。在创伤修复中它的主要作用有：①参与早期的神经源性炎性反应而促进创口愈合,
玉红膏对大鼠皮肤创面愈合修复中神经肽P物质的影响
