血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验报告之欧阳科创编

由天下分享时间：2024/12/19 21:10:51 加入收藏我要投稿点赞

欧阳科创编 2024.02.05

生物化学实验报告

时间：2024.02.05

创作：欧阳科姓名：学号：专业年级：组别：

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称实验日期合作者评分

教师签名

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量

实验地点指导老师

批改日期

一、实验目的

1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法； 1.2.了解电泳技术的一般原理；

1.3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。二、实验原理

2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在

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醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。

2.2.血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量

血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％清蛋白 4.64 69,000 57～72 α1－球蛋白 5.06 200,000 2～5 α2－球蛋白 5.06 300,000 4～9 β－球蛋白 5.12 90,000～150,000 6.5～12 γ－球蛋白 6.85～7.3 156,000～950,000 12～20 缓冲液pH=8.6，pI＜pH。

血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。预测血清蛋白电泳区带图

血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带 2.3.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。三、材料与方法：

3.1.实验材料：

3.1.1.实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH溶液。

3.1.2.实验器材：①V-1100分光光度计（×1）；②恒温水浴

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箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）；⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；?直流稳压电泳仪（×1） 3.2.实验步骤

1．准备与点样：①取2×8cm的膜条；②亚光面距一端1.5cm处取一点样线；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样。点样示意图：注意：点样线尽量点得细窄而均匀。 — 小组标记样品标记 8cmm点样线 + (粗面） 2cm 点样区 2.电泳：①放置膜条（点样面向下，点样端置于阴极）；②膜条贴紧滤纸，拉直膜条；③平衡五分钟；④通电（调节电压120v/电流，时间：45~60 min）；③关闭电源。 1.5cm 电泳槽解剖图： 3.染色、漂洗：①通电完毕；②取出膜条；③浸于染色液（氨基黑10B）中，5min；④取出膜条，浸于漂洗液；⑤反复漂洗2次，直至漂净；⑥滤纸吸干薄膜。 4.定量（洗脱比色法）（因实验室等原因，未做）欧阳科创编 2024.02.05