Con A建立小鼠急性免疫性肝损伤模型研究
单莹莹，王佳烨，王晓丽，于佳卉，王春梅，李 贺，孙红霞，张成义，陈建光，孙靖辉
【摘 要】摘要：目的 探讨刀豆蛋白 A(Con A)诱导急性免疫性肝损伤小鼠模型的最适剂量及最佳给药途径.方法 选用雄性ICR小鼠180只，分为尾静脉注射与腹腔注射两种给药途径，每个给药途径分为6组，对照组、Con A 10，20，30，40和50 mg/kg剂量组，Con A各剂量组注射相应剂量的Con A，对照组注射生理盐水，在注射8 h后，检测各组血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平，采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化.结果 与对照组比较，腹腔注射Con A各剂量组的ALT和AST水平无明显变化；尾静脉注射Con A 40 mg/kg剂量组的ALT和AST水平明显升高(P<0.05)；组织学病理显示：肝损伤明显，Con A 10，20，30 mg/kg剂量组ALT和AST水平变化不明显，50 mg/kg剂量组死亡率较高.结论 小鼠尾静脉注射40 mg/kg的Con A可成功诱导ICR小鼠的急性肝损伤. 【期刊名称】北华大学学报（自然科学版） 【年(卷),期】2019(020)001 【总页数】4
【关键词】刀豆蛋白 A；免疫性肝损伤；小鼠
基金项目：吉林省科技计划项目(20170307016YY)；吉林省教育科学技术研究项目(JJKH20180373KJ).
肝脏疾病严重影响人类健康，目前进行肝脏疾病的治疗仍然是世界性的问题，建立与人类肝脏疾病病理机制相似的实验性肝损伤动物模型，有助于肝脏疾病
发病机制的研究，因此，成功建立科学性、实用性、重现性良好的实验性肝损伤动物模型是研究肝病发生机制、筛选保肝药物、探索保肝作用的重要工具[1]. 近年来，国内外常用Con A建立急性免疫性肝损伤动物模型，而Con A的剂量并没有统一标准，干预时间也不一致，这对实验操作造成了一定的困难[2].为此，本研究以ICR小鼠为研究对象，观察尾静脉注射Con A建立急性肝损伤模型的适用剂量，为急性肝损伤模型建立时所用Con A的剂量选择提供参考.
1 材料与方法
1.1 实验动物
雄性SPF级ICR小鼠(长春市亿斯实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK(吉)2016-0003)，体质量(22±2) g. 1.2 试剂与仪器
刀豆蛋白A(Con A)Ⅳ型(美国Sigma公司)；血清ALT，AST试剂盒(南京建成生物工程研究所)；酶标仪(瑞士Tecan公司)；荧光倒置显微镜(日本OLYMPUS公司).
2 实验方法
2.1 动物分组及给药
雄性ICR小鼠180只，分为尾静脉注射与腹腔注射两种给药途径，每个给药途径分为6组：对照组、Con A 10，20，30，40，50 mg/kg剂量组，每组15只.将Con A各剂量组注射相应剂量的Con A，对照组注射同等体积的生理盐水，给药后小鼠禁食不禁水8 h，取血和肝脏待测. 2.2 血清ALT，AST的测定
将血液3 000 r/min、离心10 min以获得血清，按试剂盒说明书进行AST和
ALT检测，运用酶标仪于520 nm处测定吸光度值. 2.3 肝组织病理切片的制备
将肝组织放置在配好的福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，切片，苏木素-伊红(H&E)染色，于显微镜下观察肝组织病理改变. 2.4 统计学分析
应用SPSS 19.0软件进行统计分析，所有值均以平均值±标准差表示，以P<0.05为差异具有统计学意义，从P<0.01为差异具有显著统计学意义.
3 结 果
3.1 Con A注射后各组小鼠死亡数量
尾静脉注射Con A 10，20，30，40 mg/kg剂量组在8 h内小鼠死亡0只，50 mg/kg剂量组8 h内小鼠死亡8只，腹腔注射Con A 剂量组8 h内小鼠未见死亡.
3.2 Con A对各组小鼠血清ALT，AST含量的影响
与对照组比较，在尾静脉注射Con A剂量为10，20，30 mg/kg时，血清中AST与ALT的水平无明显差异，Con A剂量为40和50 mg/kg时，血清中AST与ALT的水平明显升高(P<0.01).见表1.与对照组比较，腹腔注射Con A各剂量组血清中ALT与AST水平未见明显变化.见表2. 3.3 Con A对各组小鼠肝脏病理组织学的影响
在200倍光镜下，对照组肝组织形态大小正常，肝小叶结构清晰.与对照组比较，尾静脉注射Con A 10，20，30 mg/kg剂量组未见明显异常，40和50 mg/kg剂量组出现大量淋巴细胞浸润，中央静脉充血，且可见大量肝细胞核破裂和凋亡小体，并可见片状坏死，肝小叶失去正常结构，肝索排列紊乱[3].见图
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