HSCT细胞培养及鉴定实验报告

由天下分享时间：2024/12/19 17:18:55 加入收藏我要投稿点赞

HSC-T6大鼠肝星状细胞培养及鉴定实验报告

前言

肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)的名称有多种多样，如肝贮脂细胞（fat-storingcell，FSC）、脂细胞（1ipocyte）、维生素A贮存细胞（vitaminA-storingcell）、窦周细胞（perisinusoidalcell）、Ito细胞等。HSC位于Disse间隙内，紧贴着肝窦内皮细胞（sinusoidalendothelialcells,SEC）和肝细胞。其形态不规则，胞体呈圆形或不规则形，常伸出数个星状胞突包绕着肝血窦。此外，HSC还伸出胞突与肝细胞、邻近的星状细胞相接触。HSC胞质内有1～14个直径约1.0～2.0μm的富含维生素A和甘油三酯的脂滴，胞浆中有丰富的游离核糖体、粗面内质网及发达的高尔基复合体。胞核形态不规则，由于脂滴的挤压，常致细胞核有一个或多个凹陷，核内可见1～2个核仁。正常肝脏中HSC的数目很少，只占肝细胞总体数目的5%～8%及总体体积的1.4%，但HSC的立体分布和伸展足以覆盖整个肝窦微循环。

正常情况下HSC表现为富含VitaminA脂滴的静止型，其功能主要有：

（1）代谢和贮存VitaminA：肝脏储存有体内80%左右的维生素A，对体内维生素A的代谢起着重要作用。视黄醛在小肠内酯化后被运输到肝脏并与特异的视黄醛结合蛋白结合，然后转运到邻近的HSC储存。

（2）储存脂肪：正常HSC胞质内的脂滴含有大量的甘油三酯，为肝细胞提供能源。

（3）合成和分泌胶原及糖蛋白、蛋白多糖等基质成分。目前的研究认为，HSC是正常及纤维化肝脏中细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）的主要合成细胞。正常肝脏中HSC

合成的胶原以Ⅰ型、Ⅲ和Ⅳ型为主，其合成量是肝细胞的10倍、内皮细胞的20倍以上。HSC还能合成纤维连接蛋白、层连蛋白和粗纤维调理素等糖蛋白成分，以及硫酸皮素、硫酸软骨素和透明质酸等蛋白多糖。

（4）合成基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMP）及其组织抑制剂（tissueinhibitorofmetalloproteinase，TIMP）:正常情况下，HSC能分泌多种胶原酶和基质降解蛋白酶如基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-2等以降解各种细胞外基质，同时分泌组织金属蛋白酶抑制剂TIMP-1防止胶原过度降解，使肝脏ECM的合成和分解处在一个动态平衡中。

（5）表达细胞因子及受体：正常情况下，HSC可以分泌肝细胞生长因子（HGF），参与肝细胞再生的调控。此外，HSC还能表达少量的转化生长因子（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）、血小板衍生的生长因子（Plateletderivedgrowthfactor，PDGF）和胰岛素样生长因子（IGF）等，同时HSC能表达TGF-β1的II、III型受体和PDGF受体的α亚单位等。

（6）参与肝窦血流调节：HSC伸出胞突包绕着肝窦，通过其纤长突起的收缩功能调节肝窦内微循环，从而影响着肝脏的血流分布和门静脉压力。

一、材料与方法

1.实验材料

1.1实验材料

大鼠肝星状细胞株HSC-T6购自与中国科学院上海细胞所。

1.2主要仪器

CO2细胞培养箱：上海力康仪器有限公司SmartCellHF-90

生物安全柜：上海力康仪器有限公司HF1200LC

台式高速冷冻离心机：上海力康仪器有限公司Neofuge15R

台式低速离心机：上海飞鸽仪器有限公司TGL-16GB

荧光倒置显微镜：日本尼康公司EclipseTS100-F

显微镜：日本尼康公司E200