脂蛋白酯酶基因多态性与青年高血压脑出血相关性研究
张瑜 赵迎春 顾彬
【摘 要】【摘要】目的 探讨脂蛋白酯酶基因多态性与青年高血压性脑出血的相关性，对青年高血压脑出血的发病机制做进一步的探讨。方法 选取我院2011年7月～2014年12月收治脑血管病患者共131例，其中脑出血患者68例(脑出血组)，脑梗死患者63例(脑梗死组)，选取健康体检者63例为正常对照组。采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法，检测脑出血组及正常对照组、脑梗死组脂蛋白酯酶基因多态性。结果 脑出血组T和G等位基因频率分别为94.9%和5.1%，脑梗死组为85.7%和14.3%，正常对照组为77.8%和22.2%。与正常对照组相比，脑出血组T和G等位基因频率的差异具有统计学意义(P<0.05)，脑梗死组的差异无统计学意义(P>0.05)。脑出血组、脑梗死组及正常对照组中GG基因型频率均最低，脑出血组和正常对照组相比，基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。应用Hardy-Weinberg平衡检验提示本研究人群因频率符合遗传平衡，具有群体代表性。结论 脂蛋白酯酶基因多态性与青年高血压性脑出血发病密切相关。 【期刊名称】西部医学 【年(卷),期】2017(029)006 【总页数】5
【关键词】【关键词】青年高血压性脑出血；脂蛋白酯酶；基因多态性 ·论著·
脑出血是急性脑血管病中最严重的一种，其中青年脑出血因起病急骤、病情凶险，死亡率极高，受到广泛关注[1]。高血压性脑出血在青年脑出血中有其特殊
的病理变化[2]。脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase，LPL)存在于脑中，可调节能量平衡、体重变化及认知功能[3-4]并在动脉粥样硬化的病理过程中起重要作用[5-7]。LPL Hind Ⅲ位点多态性是LPL常见基因多态性，脑出血及其相关性目前研究较少。本研究运用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)和限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)方法，对青年高血压性脑出血患者LPL基因多态性进行分析，探讨LPL亚基Hind Ⅲ位点多态性与青年高血压脑出血的相关性，为探索青年高血压脑出血的发病机理提供依据。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选取我院2011年7月～2014年12月收治脑血管病患者共131例。其中脑出血患者68例，作为脑出血组，男性43例，女性25例，年龄25～45岁，平均(42.60±4.23)岁。脑梗死患者63例为脑梗死组，男性37例，女性26例，年龄25～45岁，平均(43.42±5.61)岁。选取健康体检者63例为正常对照组。男性39人，女性24人，年龄25～45岁，平均(43.68±2.64)岁。脑出血组、脑梗死组均符合全国第四届脑血管病学术会议制定的诊断标准，并经头颅CT或/和MRI检查证实。高血压病的诊断标准为BP≥140/90 mmHg或已在服用降压药物。排除继发和不明原因脑出血者。 1.2 研究方法
1.2.1 DNA提取 采集肘静脉血5 ml，用肝素钠抗凝。采用BLOOD DNA MIDI KIT试剂盒(美国OMEGA公司)提取DNA，所有DNA均用紫外分光光度计进行纯度和定量的测定。
1.2.2 PCR扩增及产物酶切 PCR扩增所使用的引物由上海今迈生物公司合成。
上游引物序列为：5’-TTAGGGAACAAACCTCC-3’,下游引物序列为：5’-CTGCCTTCAGCTAGACATTG-3’。用HindⅢ限制性内切酶酶切。
1.2.3 检测LPL亚基Hind Ⅲ位点多态性 比较正常对照组、脑梗死组、脑出血组基因频率和基因型。
1.3 统计学方法 采用 SPSS 13.0统计软件对资料进行统计分析。基因型和等位基因频率的差异用χ2 检验，按Hardy-Weinberg平衡法检验样本的群体代表性。
2 结果
2.1 脂蛋白酯酶Hind Ⅲ位点PCR及酶切结果 Hind Ⅲ 位点PCR扩增产物片段长度340 bp(图1)。Hind Ⅲ 限制性内切酶特异性识别AAGCTT片段，可将Hind Ⅲ 位点切成120 bp和220 bp两个片段，当该位点T→G时，Hind Ⅲ 限制性内切酶则无法识别该片段，则无法剪切。经Hind Ⅲ 内切酶酶切后得到3种DNA条带，见图2。纯合子(TT)基因型长度120 bp、220 bp的2个条带；纯合子(GG)基因型长度340 bp的1个条带；杂合子(GT)基因型长度120 bp、220 bp、340 bp的3个条带。
2.2 脂蛋白酯酶Hind Ⅲ位点的核苷酸序列检测结果 随机抽取10%样本进行PCR扩增，扩增产物送至上海今迈生物公司进行纯化测序，测序结果在NCBI的GENEBANK中进行BLAST，同源性达98%以上。野生型TT纯合子，产生T单峰信号(图3)，突变型纯合子GG(图4)，产生G单峰信号，GT杂合子产生G、T双峰信号，见图5。
2.3 3组等位基因频率比较 脑出血组T和G等位基因频率分别为94.9%和5.1%，脑梗死组为85.7%和14.3%，正常对照组为77.8%和22.2%。与正常
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