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本技术中介绍了一株淡紫拟青霉菌及其在抑制植物生长中的应用。该淡紫拟青霉菌名称为Purpureocillium lilacinum Scaumcx04，保藏编号为GDMCC
NO：60794，该菌株于2024年9月27日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。本技术中通过培养淡紫拟青霉菌或
其孢子获得的培养物，以及进一步经有机溶剂萃取和层析柱纯化后的次生代谢产物能够抑制植物地上部分茎的生长和地下部分根的生长，同时能够抑制植物种子萌发，延长发芽的时间，因此可将其作为植物生长的调节剂和植物除草剂，为植物生长调节剂和除草剂的开发提供一种有效途径。
技术要求
1.一株淡紫拟青霉菌，其特征在于：名称为Purpureocillium lilacinum Scaumcx04，保藏编号为GDMCC NO：60794，该菌株于2024年9月27日保藏
于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。
2.一种权利要求1所述的淡紫拟青霉菌的孢子。
3.权利要求2所述的淡紫拟青霉菌的孢子的制备方法，其特征在于：通过将权利要求1所述的淡紫拟青霉菌接种到培养基上，于28～30℃条件下进
行培养，得到淡紫拟青霉菌的孢子；
所述的培养培养基为以大米、稻壳、小麦、小麦壳和马铃薯中的一种以上为原料制备的固体或液体培养基；所述的培养的条件为：100～180r/min培养1～30天。
4.一种淡紫拟青霉菌培养物，其特征在于：通过培养权利要求1所述的淡紫拟青霉菌和/或权利要求2所述的淡紫拟青霉菌的孢子获得的。5.权利要求4所述的淡紫拟青霉菌培养物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1所述的淡紫拟青霉菌和/或权利要求2所述的淡紫
拟青霉菌的孢子接种到培养基中，于28～30℃下进行培养，过滤，得到淡紫拟青霉菌培养物；所述的培养基为PDB培养基；
所述的培养的条件为：100～180r/min培养1～30天；所述的过滤为采用纱布进行过滤。
6.一种淡紫拟青霉菌次生代谢产物，其特征在于，通过如下任一种方法获得：
(A)将权利要求4所述的淡紫拟青霉菌培养物用有机溶剂萃取，蒸发浓缩，得到淡紫拟青霉菌次生代谢产物；其中，所述的有机溶剂为乙酸乙酯、
氯仿和正丁醇中的至少一种；
(B)将权利要求4所述的淡紫拟青霉菌培养物用有机溶剂萃取，蒸发浓缩，获得粗提物；然后将粗提物采用Sephadex G-200凝胶层析柱进行纯化，
用有机溶剂进行洗脱，收集洗脱液，再减压浓缩，得到淡紫拟青霉菌次生代谢产物；方法(A)中所述的萃取所用有机溶剂为乙酸乙酯；
方法(B)中所述的萃取所用有机溶剂为乙酸乙酯和乙醇中的至少一种；方法(B)中所述的洗脱所用有机溶剂为氯仿和醇类中的至少一种；所述的醇类为甲醇和乙醇中的至少一种。
7.权利要求1所述的淡紫拟青霉菌，权利要求2所述的淡紫拟青霉菌的孢子，权利要求4所述的淡紫拟青霉菌培养物和权利要求6所述的淡紫拟青霉
菌次生代谢产物中的至少一种在抑制植物生长中的应用，其特征在于：
所述的植物为蔬菜、水果和杂草；进一步为黑麦草、番茄、烟草、萝卜苗、水稻、稗草和马齿苋中的至少一种。
8.权利要求1所述的淡紫拟青霉菌，权利要求2所述的淡紫拟青霉菌的孢子，权利要求4所述的淡紫拟青霉菌培养物和权利要求6所述的淡紫拟青霉
菌次生代谢产物中的至少一种在制备植物生长调节剂或除草剂中的应用。
9.一种植物生长调节剂，其特征在于：包含权利要求1所述的淡紫拟青霉菌，权利要求2所述的淡紫拟青霉菌的孢子，权利要求4所述的淡紫拟青霉
菌培养物和权利要求6所述的淡紫拟青霉菌次生代谢产物中的至少一种。
10.一种除草剂，其特征在于：包含权利要求1所述的淡紫拟青霉菌，权利要求2所述的淡紫拟青霉菌的孢子，权利要求4所述的淡紫拟青霉菌培养
物和权利要求6所述的淡紫拟青霉菌次生代谢产物中的至少一种。
技术说明书
一株淡紫拟青霉菌及其在抑制植物生长中的应用技术领域
本技术属于微生物领域，特别涉及一株淡紫拟青霉菌及其在抑制植物生长中的应用。背景技术
农田杂草是生长在农作物田间的，除了有目的栽培的植物以外的农田其他植物，它是长期适应当地作物、耕作、气候、土壤等生态条件而生存下来的，与栽高农作物收获难度等，给人类生产和生活带来极大的不便。
化学除草剂的开发与应用开辟了杂草防除的新纪元，其可更高效地控制农田杂草的蔓延，与人工除草相比，它具有下述四个优点：省工省力、药效快、施用要求，减少化学除草剂使用的呼声日益高涨。
微生物源除草剂是指以微生物为研究对象开发制备的具有除草活性的制剂。微生物除草剂根据对微生物的利用方式可分成两类：一类是活体微生物除草剂，
较化学除草剂，微生物源除草剂具有显著的使用价值与商业价值：第一，防治谱较窄，表现出一定的选择性，仅对特定的对象表现除草活性；第二，使用中
植物生长调节剂是一类与植物激素具有相似生理和生物学效应的物质，对目标植物而言，植物生长调节剂是外源的非营养性化学物质，通常可在植物体内传技术内容
本技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一株淡紫拟青霉菌。本技术的另一目的在于提供所述淡紫拟青霉菌在抑制植物生长中的应用。本技术的目的通过下述技术方案实现：
一株淡紫拟青霉菌，名称为Purpureocillium lilacinum Scaumcx04(淡紫拟青霉Scaumcx04)，保藏编号为GDMCC NO：60794，该菌株于2024年9月27日保藏于一种上述淡紫拟青霉菌的孢子。
所述的淡紫拟青霉菌的孢子的制备方法，通过将上述淡紫拟青霉菌接种到培养基上，于28～30℃条件下进行培养，得到淡紫拟青霉菌的孢子。
所述的培养培养基为以大米、稻壳、小麦、小麦壳和马铃薯中的一种以上作物为原料制备的固体或液体培养基；优选为察氏培养基、麦芽汁培养基、马铃薯所述的培养的条件为：100～180r/min培养1～30天；优选为：120～180r/min培养7～14天；更优选为7天。所述的培养的温度优选为28℃。
一种淡紫拟青霉菌培养物，通过培养上述淡紫拟青霉菌和/或淡紫拟青霉菌的孢子获得的。
所述的淡紫拟青霉菌培养物的制备方法，包括如下步骤：将上述淡紫拟青霉菌和/或淡紫拟青霉菌的孢子接种到培养基中，于28～30℃下进行培养，过滤，得所述的培养基优选为PDB培养基。所述的培养的温度优选为28℃。
所述的培养的条件为：100～180r/min培养1～30天；优选为：120～180r/min培养7～14天；更优选为7天。
所述的过滤优选为采用纱布进行过滤，以去除大块菌和杂质。一种淡紫拟青霉菌次生代谢产物，通过如下任一种方法获得：
(A)将上述淡紫拟青霉菌培养物用有机溶剂萃取，蒸发浓缩，得到淡紫拟青霉菌次生代谢产物；其中，所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿和正丁醇中的至少一
(B)将上述淡紫拟青霉菌培养物用有机溶剂萃取，蒸发浓缩，获得粗提物；然后将粗提物采用Sephadex G-200凝胶层析柱进行纯化，用有机溶剂进行洗脱，收
方法(A)和(B)中所述的蒸发浓缩的温度优选为45℃。方法(A)中所述的萃取所用有机溶剂优选为乙酸乙酯。
方法(B)中所述的萃取所用有机溶剂优选为乙酸乙酯和乙醇中的至少一种。方法(B)中所述的洗脱所用有机溶剂为氯仿和醇类中的至少一种。所述的醇类为甲醇和乙醇中的至少一种。
方法(B)中所述的收集洗脱液优选为通过如下方法进行实现：每30min收集一管，共收集31份洗脱样品，并进行编号，为1-31号；然后将合并编号为1-9的洗脱所述的淡紫拟青霉菌，淡紫拟青霉菌的孢子，淡紫拟青霉菌培养物和淡紫拟青霉菌次生代谢产物中的至少一种在抑制植物生长中的应用。所述的抑制植物生长为通过抑制植物地上部分茎的生长和地下部分根的生长，和/或抑制植物种子萌发以延长发芽的时间来实现。
所述的应用为将淡紫拟青霉菌培养物或淡紫拟青霉菌次生代谢产物灌溉到植物根部，或将淡紫拟青霉菌培养物或淡紫拟青霉菌次生代谢产物喷施到植物上，
所述的植物为单子叶和双子叶植物；包括蔬菜、水果和杂草等；进一步包括茄科植物、禾本科植物、草本植物等；优选为黑麦草、番茄、烟草、萝卜苗、水
所述的淡紫拟青霉菌次生代谢产物的浓度为0.0001mg/ml～10mg/ml；优选为0.01～1mg/ml；更优选为1mg/mL；每株植物的施加量为1ml～200ml(优选为4～50m所述的淡紫拟青霉菌，淡紫拟青霉菌的孢子，淡紫拟青霉菌培养物和淡紫拟青霉菌次生代谢产物中的至少一种在制备植物生长调节剂或除草剂中的应用。所述的草为单子叶和双子叶杂草；优选为稗草。
所述的淡紫拟青霉菌次生代谢产物的浓度为0.0001mg/ml～10mg/ml；优选为0.01～1mg/ml；更优选为1mg/mL。
一种植物生长调节剂，包含所述的淡紫拟青霉菌，淡紫拟青霉菌的孢子，淡紫拟青霉菌培养物和淡紫拟青霉菌次生代谢产物中的至少一种。所述的植物生长调节剂还可以含有其他的载体，如乳剂等。
一种除草剂，包含所述的淡紫拟青霉菌，淡紫拟青霉菌的孢子，淡紫拟青霉菌培养物和淡紫拟青霉菌次生代谢产物中的至少一种。所述的除草剂还可以含有其他的载体，如乳剂等。
所述的淡紫拟青霉菌次生代谢产物的有效浓度为0.0001mg/ml～10mg/ml；优选为0.01～1mg/ml。本技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本技术是从马齿苋中分离并鉴定具有潜在除草活性的真菌菌株淡紫拟青霉(Purpureocillium lilacinum)，将其命名为scaumcx04。该淡紫拟青霉的孢子，淡紫拟
(2)本技术中的淡紫拟青霉的发酵液和次生代谢产物对植物(稗草等)生长的抑制效果较为明显，加入淡紫拟青霉发酵液中的植物叶片明显发黄，其效果甚至比
附图说明
图1是淡紫拟青霉菌的菌落形态图；其中，A为PDA培养皿的正面；B为PDA培养皿的反面。图2是淡紫拟青霉菌的显微形态图；其中，A为分生孢子梗；B为分生孢子和菌丝体；C为分生孢子。
图3是淡紫拟青霉菌发酵液对植物生长的影响图；其中，A为淡紫拟青霉菌发酵液对萝卜苗的影响；B为淡紫拟青霉菌发酵液对稗草的影响。
图4是淡紫拟青霉菌与除草剂对植物生长抑制效果的对比图；其中，A为淡紫拟青霉发酵液以及0.5mg/mL的淡紫拟青霉发酵液次生代谢产物(淡紫拟青霉发酵液图5是不同处理的萝卜幼苗生长情况图。
图6是不同组分处理的稗草幼苗生长情况图。图7是实施例6中的土培平面种植图。具体实施方式
下面结合实施例对本技术作进一步详细的描述，但本技术的实施方式不限于此。除非特别说明，本技术采用的培养基、试剂、方法和设备为本技术领域常规实施例1淡紫拟青霉菌的筛选、分离以及鉴定
1、菌株的分离纯化
将马齿苋(来源于广东广州某地)的茎、根用自来水洗净，晾干，75％(w/w)酒精浸泡2min，无菌水冲洗，0.1％(w/w)氯化汞浸泡1.5min，无菌水冲洗；叶用自来
2.菌株的形态以及ITS鉴定(1)菌株形态特征
将菌株Scaumcx04接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基(马铃薯/葡萄糖/琼脂，购买于广东环凯微生物科技有限公司，每升含马铃薯300g，葡萄糖20g，琼脂15g)上进马铃薯葡萄糖琼脂培养基:菌落圆形，丝绒状，菌丝体初为自色，产孢后呈现淡紫色，表面无分泌物。菌落反面呈无色至淡黄色。
(2)显微形态特征
将菌株Scaumcx04置于显微镜下观察，结果如图2所示：分生孢子梗单生或聚集成孢梗束，长度为19μm～35μm。通常3～5个瓶梗着生于分生孢子梗顶部。瓶梗
(3)样品Scaumcx04的ITS测序序列如下:
AACCCACTGTGACCTTACCTCAGTTGCCTCGGCGGGACCGCCCCGGCCGCCGCGCAAGCGGCGCCGGACTCCAAGGCGCCCGCCGCAGGGACCCAAA
菌株Scaumcx04的ITS测序序列与Purpurecilium lilacinum(淡紫拟青霉)同源性达99.72％，其培养特征及显微形态特征与Purpurecilium lilacinum(淡紫拟青霉)最相实施例2淡紫拟青霉培养液的不同溶剂萃取物对植物生长的影响
(1)配制1L的PDB培养液(即液体PDB培养基)，装入2L三角瓶封口，于121℃下高温高压灭菌30min后备用。在无菌条件下将淡紫拟青霉Scaumcx04(直径为0.5cm
(2)将所得的菌液用纱布过滤(去除大块菌杂)取得上清液，并分为三等分，随后分别在上清液中加入等体积的正丁醇、乙酸乙酯和石油醚进行萃取。萃取后将(3)将所得三种发酵液粗提物用蒸馏水配置成浓度为0mg/mL(ck)、0.01mg/mL、0.1mg/mL、1mg/mL的溶液。
(4)准备若干大小相同的培养皿，在其内垫上滤纸。取大小、色泽和饱满程度基本一致的萝卜苗种子适量，然后将萝卜苗种子16粒整齐置于垫有滤纸的培养皿
(5)每天定时观察萝卜苗的长势，并在4d后取出培养皿中的种子，分别统计每个培养皿中种子的发芽率以及发芽种子的平均根长和平均芽长并拍照记录。结果
本实验通过用不同有机溶剂萃取淡紫拟青霉菌液获得的不同次生代谢产物后用其培养萝卜苗并观察其对生长的影响，以此判断哪种有机溶剂萃取出的化合物加方便，故选择用乙酸乙酯萃取的化合物进行后续实验。
表1不同有机溶剂萃取的淡紫拟青霉次生代谢产物对萝卜苗生长的影响
注：表1中不同有机溶剂(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇)为不同批次的实验结果，因此每一批次都做了空白对照。实施例3、淡紫拟青霉培养液乙酸乙酯萃取物对不同植物生长的影响
(1)配制1L的PDB培养液，装入2L三角瓶封口，于121℃下高温高压灭菌30min后备用。在无菌条件下将淡紫拟青霉Scaumcx04(直径为0.5cm的菌种)接种于装有
(2)将所得的菌液用纱布过滤得上清液，随后在上清液中加入等体积的乙酸乙酯进行萃取。萃取后将所得的有机相分多次转移至250mL圆底烧瓶中，置于旋转(3)将淡紫拟青霉的发酵液粗提物用蒸馏水配置成浓度为0mg/mL(ck)、0.01mg/mL、0.1mg/mL、1mg/mL的溶液。
(4)准备若干大小相同的培养皿，在其内垫上滤纸。取大小、色泽和饱满程度基本一致的黑麦草种子适量，然后将黑麦草种子36粒整齐置于垫有滤纸的培养皿
(5)每天定时观察黑麦草的长势，并在3d后补加4mL蒸馏水。7d后取出培养皿中的种子，分别统计每个培养皿中种子的发芽率以及发芽种子的平均根长和平均
一株淡紫拟青霉菌及其在抑制植物生长中的应用的制作流程
