一、名词解释
分子生物学:包括对蛋白质和核酸等生物大分子的结构与 功能,以及从分子水平研究生命活动
RNA 组学:RNA 组学研究细胞中 snmRNAs 的种类、结构和功能。同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同时间、之间的 DNA 转移及基因重组即为转导作用
位点特异重组:位点特异重组(site-specific
recombination) 是由整合酶催化,在两个 DNA 序列的特异位点间发生的整合。
12-23规则:重组发生在间隔为12bp 到23bp 的不同信号序不同状态下 snmRNAs 的表达具有时间和空间特异性。增色效应: DNA 变性时其溶液 OD260增高的现象。 减色效应: DNA 复性时其溶液 OD260降低的现象。 Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成,在这一范围 内,紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为 DNA 的解链温度,又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与 G+C 含量成正比。
解链曲线:如果在连续加热 DNA 的过程中以温度对 A260 (absorbance,A,A260代表溶液在260nm 处的吸光率) 值作图,所得的曲线称为解链曲线。
DNA 复性:在适当条件下,变性 DNA 的两条互补链可恢复 天然的双螺旋构象,这一现象称为复性。
核酸分子杂交:在 DNA 变性后的复性过程中,如果将不同种类的 DNA 单链分子或 RNA 分子放在同一溶液中,只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系,在适宜的条件(温度及离子强度)下,就可以在不同的分子间形成杂化双链,这种现象称为核酸分子杂交。
基因:广义是指原核生物、真核生物以及病毒的 DNA 和 RNA 分子中具有遗传效应的核苷酸序列,是遗传的基本单位。狭义指能产生一个特定蛋白质的 DNA 序列。
断裂基因:不连续的基因称为断裂基因,指基因的编码序列在 DNA 上不连续排列而被不编码的序列所隔开。
重叠基因:核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因, 或称嵌套基因。
致死基因:删除后可导致机体死亡的基因。
基因冗余:由于一基因在个体中有若干份拷贝,当删除其 中一个时,个体的表型不发生明显变化。
DNA 重组:DNA 分子内或分子间发生遗传信息的重新组合, 又称为遗传重组或基因重排。
同源重组:发生在同源序列间的重组称为同源重组,又称基本重组。
接合作用:当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时, 质粒 DNA 从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌) 的 DNA 转移称为接合作用(conjugation)。
转化作用:通过自动获取或人为地供给外源 DNA,使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型,称为转化作用(transformation)。
转导作用:当病毒从被感染的(供体)细胞释放出来、再次感染另一(供体)细胞时,发生在供体细胞与受体细胞
列之间,称为12-23规则。
转座子:(transposon)在基因中可以移动的一段 DNA 序列。
转座:由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition)。
克隆:来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 DNA 克隆:应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物 质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA)与载体DNA 接合成一具有自我复制能力的DNA 分子— —复制子(replicon),继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一 DNA 分子,也称基因克隆或重组 DNA (recombinant DNA)。
基因工程:(genetic engineering)实现基因克隆所用的 方法及相关的工作称基因工程,又称重组 DNA 工艺学。限制性核酸内切酶:(restriction endonuclease, RE) 是识别 DNA 的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双 链 DNA 的一类内切酶。
同功异源酶:来源不同的限制酶,但能识别和切割同一位点,这些酶称同功异源酶。
同尾酶:有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同,但切割 DNA 后,产生相同的粘性末端,称为同尾酶。
载体:为携带目的基因,实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些 DNA 分子。
复制:(replication)是指遗传物质的传代,以母链 DNA 为模板合成子链 DNA 的过程。
半保留复制:(semi-conservative replication)DNA 生物合成时,母链 DNA 解开为两股单链,各自作为模板(template)按碱基配对规律,合成与模板互补的子链。子代细胞的 DNA,一股单链从亲代完整地接受过来,另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的 DNA 都和亲代 DNA 碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。
复制子:(replicon)DNA 分子中能独立进行复制的单位称为复制子。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子。
复制眼:(replication eye)DAN 正在复制的部分在电镜下观察起来犹如一只眼睛,称为复制眼。
复制叉:(replication fork)复制一开始,复制起始点要形成一个特殊的叉型结构,是复制有关的酶和蛋白质组
装成复合物和新链合成的部位,这种结构称为复制叉。端粒:(telomere)指真核生物染色体线性 DNA 分子末端的结构。
转录:(transcription) 生物体以 DNA 为模板合成 RNA 的过程 。 不(a对sy称:mm转et录ric transcription) 在 DNA 分子双链上某一区段,一股链用作模板指引转录,另一股链不转录;模板链并非永远在同一条单链上。
模板链:DNA 双链中按碱基配对规律能指引转录生成 RNA 的一股单链,称为模板链(template strand),也称作有意义链或 Watson 链。
编码链:相对的另一股单链是编码链(coding strand), 也称为反义链或 Crick 链。
启动子:RNA 聚合酶结合模板 DNA 的部位称为启动子(promoter)
转录泡:(transcription bubble)在转录延长过程中, 由局部打开的DNA 双链、RNA 聚合酶核心酶及新生成的RNA 三者结合在一起的复合体,为空泡状结构,又称转录复合物。
转录因子:能直接、间接辨认和结合转录上游区段 DNA 的蛋白质,现已发现数百种,统称为反式作用因子(trans- acting factors)。反式作用因子中,直接或间接结合 RNA 聚合酶的,则称为转录因子(transcriptional factors, TF)。
转录后加工(RNA 的成熟):在细胞内,由 RNA 聚合酶合成的原初转录物
(pre-RNA)经过链的裂解、5`端与3`端的切除和特殊结构的形成、核苷的修饰和糖苷键的改变、以及拼接和编辑等过程,转变为成熟的 RNA 分子的过程称为 RNA 的成熟或转录后加工(post-transcriptional processing)。 RNA 编辑:改变 RNA 编码序列的方式称为 RNA 编辑。 密码子:(codon)代表一个氨基酸或蛋白合成、终止信号的核苷酸三联体。
开放阅读框:从 mRNA 5¢端起始密码子 AUG 到3¢端终止密码子之间的核苷酸序列,各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链,称为开放阅读框架(open reading frame, ORF)。
顺反子:遗传学将编码一个多肽的遗传单位称为顺反子 (cistron)。
多顺反子:原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位,转录生成的 mRNA 可编码几种功能相关的蛋白质,为多顺反子(polycistron) 。
单顺反子:真核 mRNA 只编码一种蛋白质,为单顺反子(single cistron) 。
翻译的跳跃现象:翻译中读码框发生位移或核糖体跳过一大段 mRNA 后 继续翻译称为翻译的跳跃现象。
信号序列:(signal sequence)所有靶向输送的蛋白质结构中存在分选信号,主要为 N 末端特异氨基酸序列,可引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位,这一序列称为信号序列 。
信号肽:(signal peptide)各种新生分泌蛋白的 N 端有保守的氨基酸序列称信号肽。
线粒体定向肽:由核基因组编码的线粒体外膜蛋白的 N 端具有的一段肽链。由富含带正电的氨基酸和丝氨酸、苏氨酸等。
基因表达:(gene expression)基因经过转录、翻译,产生具有特异生物学功能的蛋白质分子的过程。
操纵子:(operon)是原核生物在分子水平上基因表达调控的单位,由结构基因、启动子、操纵基因和调节基因组成; 通过调节基因编码的调节蛋白与诱导物、辅阻遏物协同作用,开启或关闭操纵基因,对操纵子结构基因的表达进行正、负控制。
转录衰减:(attenuation)是指转录可正常起动,但在转录进入第一个结构基因前即突然停止的过程。由于这一终止作用并不能使正在进行的结构基因转录中途停止,而仅是部分中途停止转录,所以称为转录衰减。
二、填空题:
1. 分子生物学的发展分为三个阶段:人类对 DNA 和遗传信息传递的认识阶段,重组 DNA 技术的 建立和发展阶段,重组 DNA 技术的应用和分子生物学的迅猛发展阶段。 2. 对 DNA 双螺旋结构的提出贡献最大的三位科学家是 J.Watson, F.Crick, O.Avery。 DNA 序列测定法有两种,分别为 G:lbert 化学法, sanger 酶法。 4. PCR 仪的发明者为 Kary B.Mullis。
5. 核酸分子由碱基,戊糖,磷酸三部分组成。
6. 在 DNA 双螺旋结构中,氢键维持双链横向稳定性,碱基堆积力维持双链纵向稳定性。 7. OD260=1.0相当于50ug/ml 双链 DNA,40ug/ml 单链 DNA,20ug/ml 寡核苷酸。 8. DNA 的密度为1.7g/cm3,相当于8M CSCL 溶液的密度。
9. 质粒 PSC101中的 P 代表构建该质粒的研究者或单位。
10. DNA 重组的种类同源重组,接合作用,转化作用,转导作用,位点特异的重组,转座。 11. 基因工程中常用载体可分为三类质粒 DNA,噬菌体 DNA,病毒 DNA。
12. 同一基因获取的方法有四种化学合成法,cDNA 文库,基因组 DNA 文库,聚合酶链式反应(PCR)。 13. 重组 DNA 导入受体菌时,对受体菌的要求为安全宿主菌,限制酶和重组酶缺陷,处于感受态;导入方式
有转化,转染,感染三种。
14. 重组 DNA 技术操作过程可形象归纳为分,切,接,转,筛。
15.1958年 Meselson 等氮的同位素试验证明了 DNA 复制为半保留复制的机制。 16. 复制的方向有单向复制,相向复制,双向复制。
17. 参与 DNA 复制的物质有底物,聚合酶,模板,引物,其他的酶和蛋白质分子。 18. 细菌的 RNA 聚合酶全酶的五个功能位点为α,β,β’,ω,σ。 19. 真核生物的转录过程可分为识别,起始,延伸,终止四个阶段。
20. 逆转录酶是一类非常复杂的酶,在其简单的一条多肽链上具有多种酶活性 DNA 聚合酶活性,RNA 酶活性, DNA 内切酶活性,DNA 旋转酶活性,螺旋酶活性,tRNA 结合酶活性。 21. 遗传密码的特点有连续性,简并性,摆动性,通用性。
22. 基因表达是受调控的,可在多个层次上进行,包括基因水平,转录水平,转录后水平,翻译水平,翻译后水平的调控。
三、翻译:
脱氧核糖核酸(DNA), 超螺旋(supercoil), 正超螺旋(positive supercoil),DNA-dependent DNA polymerase(依赖 DNA 的 DNA 聚合酶), 解螺旋酶(helicase),引物酶(primase), SSB(单 链 DNA 结合蛋白), DNA ligase(DNA 连接酶), telomerase(端粒) , cDNA(互补 DNA),
teminator(终止子), UBF(upstream binding factor)上游启动子结合因子,
TBP(TATA box-binding protein)TATA 框结合蛋白, downstream elements(下游启动子元件), TF(transeriptional factors) 转 录 因 子 , CTD(carboxyl terminal domain)羧基端结构域, EB(溴化乙锭), IF(起始因子), EF(延长因子), molecular chaperon(分子伴侣) 四、简答题:
1. 证明 DNA 是主要的遗传物质的两个重要实验是什么?
RF(释放因子),
1944,O. Avery 肺炎双球菌转化实验 1952,A.D Hershey 和 M. Chase 噬菌体感染实验
2. 简述 mRNA 的结构特点和功能?
结构特点:1、大多数真核 mRNA 的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷,同时第一个核苷酸的 C′2也是甲基化,形成帽子结构:m7GpppNm-。2、大多数真核 mRNA 的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构,称为多聚 A 尾。
功能:把 DNA 所携带的遗传信息,按碱基互补配对原则,抄录并传送至核糖体,用以决定其合成蛋白质的氨基酸排列顺序。
3. 简述 tRNA 一级结构的特点?
含 10~20% 稀有碱基,如 DHU;3′末端为 — CCA-OH;5′末端大多数为 G;具有 TyC
4. 简述 tRNA 的结构?
tRNA 的二级结构——三叶草形(氨基酸臂;DHU 环;反密码环;额外环;TΨC 环) tRNA 的三级结构——倒 L 形
5. 简述原核生物和真核生物的 rRNA 的种类?
真核生物的种类有:5S rRNA,28S rRNA,5.8S rRNA,18S rRNA;原核生物的种类有:5S rRNA,23S rRNA,16S rRNA、