第二法大肠菌群平板计数
8、 操作步骤 、 样品的稀释 按 进行。 、 平板计数
8.2.1、 选取2 个～3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1ml。同时分别取1ml生理盐水加人两个无菌平皿作空白对照。
、 及时将15 mL-20ml冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mlVRBA 覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。 、 平板菌落数的选择
选取菌落数在30-150 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为 mm 或更大。 、 证实试验
从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36℃±1℃ 培养24h-48h ，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。 、大肠菌群平板计数的报告
经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以 中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群数。
第三法大肠菌群PetrifilmTM 测试片法
10、 操作步骤 样品的稀释 按 进行。 、 测定
10.2.1、 样品接种及培养
将待检样品选取2 个-3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两张测试片。将PetrifilmTM 大肠菌群测
试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用吸管吸取1ml样液垂直滴加在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜直接落下。把压板（平面底朝下）放置在上层膜中央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少1 min 以使培养基凝固。将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，36℃±1℃ 培养24h±2h 。 、 判读
培养24h±Zh 后应立即计数，可目测或用标准菌落计数器、放大镜或PetrifilmTM 自动判读仪来计数。红色有气泡的菌落确认为大肠菌群。圆形培养区边缘上及边缘以外的菌落不作计数。当培养区域出现大量气泡，大量不明显小菌落或培养区呈暗红色三种情况，表明大肠菌群的浓度较高，需要进一步稀释样品以获得更准确的读数。
、 大肠菌群测试片计数的报告
选取菌落数在15-150 之间的测试片，计数其红色有气泡的菌落数，两个测试片的平均菌落数乘以稀释倍数即为每克（或毫升）样品中的大肠菌群菌落形成单位（CFU ）数。如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15 ，则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数报告；如果最高稀释度的菌落数大于150 ，计数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告。计数菌落数大于150 的测试片时，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20 即为测试片上估算的菌落数（圆形生长面积为20cm2 , ）。报告单位以CFU/g （或CFU/mL ）表示。
第一法大肠菌群mpn计数
