▲图1. 不同NGAL抗体组合测NGAL的校准曲线
B. 胶乳比浊平台
将几种单抗混合包被于胶乳颗粒，制备成胶乳试剂，检测0～5000 ng/mL的NGAL校准品，建立校准品浓度与反应吸光值的对应关系，进行线性回归拟合，如图2。
▲图2. 抗人NGAL单抗检测NGAL的校准曲线
临床比对 A. 化学发光平台
为验证抗体对适用于临床检测，利用抗体对组合（A、B、C和D组合）对50例临床样本进行检测，并与一家高质量的诊断试剂测值进行对比，检测结果如图3，此结果表明四种组合检测数据与比对试剂相关性较好。
▲图3. 不同NGAL抗体组合应用于化学发光平台对临床样本的检测
B. 胶乳比浊平台
为验证抗体是否适用于胶乳增强免疫比浊法，将本公司的自产抗体制成胶乳比浊试剂和一家高质量的诊断试剂同时对血清样本进行检测，两者相关性高达0.97（图4），说明本公司自产单抗适用于胶乳增强免疫比浊试剂。
▲图4. 自产抗体和比对试剂对血样的检测
热稳定性
将四种NGAL单克隆抗体置于-20℃、2-8℃和37℃，每隔3天测抗体的效价，从图5可以看出在2-8℃和37℃条件下抗体的滴度与-20℃条件维持在一定水平，说明该抗体稳定性好。
▲图5. 四种NGAL单抗的稳定性测定
将NGAL单抗于4℃和37℃分别放置7天，再分别偶联至胶乳颗粒，然后在同一条件下检测不同浓度的NGAL校准品，结果如表1，37℃热处理的抗体相对于4℃存放，在检测性能方面变化很小，说明该抗体稳定性合格。
▲表1.不同温度处理后的单抗对NGAL检测的比较
人NGAL多克隆抗体
科赛格最新研发的人NGAL多克隆抗体，通过胶乳平台对NGAL多抗性能进行反复验证，采用自产的多抗应用于胶乳试剂和比对试剂同时检测多份随机样本，证明NGAL多抗可以用于体外诊断。
校准曲线
将NGAL兔多抗偶联至胶乳颗粒，检测0-4900 ng/ml蛋白，样本中的NGAL会与胶乳上的多抗反应，使胶乳颗粒凝集，从而提高溶液的浊度。根据NGAL浓度与吸光值的对应关系，拟合四参数Logistic曲线（图6）。
▲图6. 多抗胶乳试剂对不同浓度NGAL检测（胶乳增强免疫比浊法）
临床比对
利用外购高质量的比对试剂和本公司多抗制成胶乳试剂对50份随机样本进行检测，结果如下图7，两者相关系数高达0.98，表明本公司自产的多克隆抗体可以用于临床检测试剂中。
▲图7.自产多抗配制试剂与外购比对试剂对临床样本测值的比较（胶乳增强免
疫比浊法） 稳定性
将多抗（未加保护剂）置于37℃加热处理7天后，然后偶联至胶乳颗粒，制备成胶乳试剂，检测不同浓度下的NGAL校准品，与未加热处理组比较（表2）。结果显示两者偏差不大，说明多抗比较稳定。
▲表2. 不同温度处理后的多抗对NGAL检测的比较
NGAL蛋白
科赛格同时还提供高质量的人NGAL蛋白，货号为CSB-DP001A 。该蛋白以液体形式供应，用SDS-PAGE检测蛋白纯度在95%以上，可以用于免疫测试的校准品、免疫印迹（WB)等方面。
肾功能及肾损伤标志物——中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)解析复习过程
