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薄层色谱三种展开方式

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单向展开所组成,每次展开包括两个步骤。第一步是按常法展开,当达到规定的展开时间后,停止展开,随即开始第二步干燥过程。与普通多次展开不同,每次展开之间不用取出薄层板,仍与溶剂贮存器接触,而是通过在薄层板背部辐射加热蒸发溶剂或在板的正面通过惰性气流使之干燥,见图7-3-27及图7-3-28。用氮气流除去溶剂是为避免一些不稳定化合物受热氧化或分解。

PMD技术是利用在固定相上溶剂前沿界面变化提高分离度的技术。在薄层板上斑点的宽度远比固定相的颗粒直径大,以致斑点的后缘由溶剂带动向前移动时,斑点的前沿还处于干燥状态(斑点的前沿与后缘之间的距离为斑点宽度)。由于样品分子的平均移动速率等于Rf值乘以溶剂的展速,在斑点的前沿开始移动时,其后缘已移动了Rf值乘上斑点的起始宽度距离,因此斑点的最后宽度相当于(1-Rf)×起始宽度。见图7-3-29。

在常规薄层色谱中,仅在展开时出现一次斑点浓集。如重复展开\次,则最后的斑点宽度降低到(1-Rf)n× 起始宽度,但实际上没有(1-Rf)n那么明显,主要是展开时又扩散增宽,所以多次展开的优点不是在斑点的宽度上,而是增加相邻斑点的距离,并经过一个最大值后再随着继续展开而降低。在PMD法中则在溶剂自薄层板上除去时尚能出现额外的斑点浓集,斑点浓集的程度随溶剂前沿退缩的速率及Rf值而不同,溶剂前沿退缩使斑点大致如同溶剂前进时一样再一次浓集。对Rf值低的斑点这种浓集更有效,这意味着分离效率及灵敏度的提高。

PMD仪器带有程序器,可将一个给定的分离程序参数送入程序器使之自动完成。

5.CAMAG自动展开室(ADC)

这种展开室是CAMAG公司生产的程序多次展开设备,存10个预编程序,可按需要设置,展开结束时自动停止,自动干燥薄层板,保证每次色谱展开保持相同条件,提高了色谱分离的重现性,减少人为误差及展开剂的损失。 6.CAMAG全自动多次展开系统(AMD)

Burger在Perry等的程序多次展开的基础上设计AMD全自动多次展开系统,其特点是以微机预编程序,设计了一个展开剂极性很宽的梯度程序,展开剂极性由高到低,每一次展距都比前一次增加,每次展开前溶剂按要求混合后由泵送至展开室,展开后自动吹干,并开始下一个程序,这样不仅每次展开后斑点得到浓集,从而增加了分离容量及改善了分离效果,而且可以用给定程序在同一薄层上分离极性相差极大的组分。AMD展开室,流程见图7-3-30。

与柱色谱中的梯度一样,AMD梯度的溶剂也是先用强极性溶剂,然后逐步减小溶剂的极性,强极性溶剂的移动距离短,非极性溶剂移动距离加长,在10-25步展开时每步增长的距离约为3mm,总展距约为3-10cm,见图7-3-31。

甲醇、乙腈为AMD中常用的极性溶剂,中等极性为二氯甲烷、二异丙醚或; t-丁基甲基醚。正己烷是最常用的非极性成分。用于AMD的溶剂必须能被真空干燥以及与系统中的溶剂成分有相似的移动特性(Kappa值)。 当AMD展开使峰宽度浓集到只有1mm时,移动距离80mm意味着分离数可

达80个。这就使AMD可与超压流动薄层(OPLC)相当。 (五)连续展开

这种方法是在不增加薄层板长度而使展距加长,使Rf值较小的组分移动较大的距离。连续展开有两种。 1.Regis短床展开室(SB/CD)

短床展开室的底部有四条凸起的埂,将薄层板以5种不同的倾斜角度放置在展开室,这样就可以进行5种不同展距的连续展开,同时薄层板从展室的开口处伸出,当展开剂展至开口处就会自然蒸发,使达到连续展开的目的,结果获得低的Rf值及好的分离,设备见图7-3-32。

如果没有SB/CD展开室,也可以用普通平底展开室进行连续展开,只要在展开室顶部的盖板上留一狭缝,使薄层板上部伸出狭缝,当展开剂行至薄层前沿时就会不断蒸发,见图7-3-33。

2.蒸发展开

这是另一种类型的连续展开,在这种展开中展开剂的蒸发是在薄板的整个表面及整个展开过程中发生的,见图7-3-34。当展开剂前缘推进到某一位置时,流入薄层的展开剂量恰好全部蒸发掉,此时处于稳定态,结果溶剂必然成负速度梯度,因此蒸发展开的分离效能比一般展开方式为高,选择性也好。这种展开有利于Rf’值小于0.3的成分的分离。但这种方法由于没有前沿,需要选择一种适当的参考物质同时展开并采用相对Rf值即Ri,s值来表示组分移动的情况。

(六)程序蒸气展开(VP-TLC)

在薄层分离时为要得到重现的Rf值以及避免“边缘效应”的产生,通常要在用展开剂蒸气饱和的展开槽中进行,为此Stahl设计了S-展开室。但Dezeeuw在对薄层分离的展开机理的研究中,总结了水蒸气和溶剂蒸气对展开的影响,认为在不饱和的展开室中用多元展开剂可以改良分离,这是由于在吸附剂上出现了吸附蒸气的浓度梯度之故。改善的程度由溶剂组分的极性和蒸发速度及所用吸附剂的特性而定。在探讨了各种类型的展开室(饱和、不饱和和夹心展开室)中溶剂蒸气作用的基础上,设计了一种程序蒸气箱(VP-箱),见图7-3-35。

薄层色谱三种展开方式

单向展开所组成,每次展开包括两个步骤。第一步是按常法展开,当达到规定的展开时间后,停止展开,随即开始第二步干燥过程。与普通多次展开不同,每次展开之间不用取出薄层板,仍与溶剂贮存器接触,而是通过在薄层板背部辐射加热蒸发溶剂或在板的正面通过惰性气流使之干燥,见图7-3-27及图7-3-28。用氮气流除去溶剂是为避免一些不稳定化合物受热氧化或分解。PMD技术
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