一、目的要求
1.了解分光光度计的结构和正确的使用方法。 2.学会绘制吸收曲线的方法,正确选择测定波长。 3.学习如何选择分光光度分析的实验条件。
二、原理
物质呈现的颜色与光有着密切关系,在日常生活中溶液所以呈现不同的颜色,是由于该溶液对光具有选择性吸收的缘故。
当一束白光(混合光)通过某溶液时,如果该溶液对可见光区各种波长的光都没有吸收,即入射光全部通过溶液,则该溶液呈无色透明状;当溶液对可见光区各种波长的光全部吸收时,则该溶液呈黑色;如某溶液对可见光区某种波长的光选择性地吸收,则该溶液呈现被吸收光的互补色光的颜色。
通常用光吸收曲线来描述物质对不同波长范围光的选择性吸收。其方法是将不同波长的光依次通过某一定浓度和厚度的有色溶液,分别测出它们对各种波长光的吸收程度(用吸光度A表示),以波长为横坐标,吸光度A为纵坐标,画出的曲线即为光的吸收曲线(吸收光谱)。光吸收程度最大处的波长,称为最大吸收波长,用λmax表示。同一物质的不同浓度溶液,其最大吸收波长相同,但浓度越大,光的吸收程度越大,吸收峰就越高。溶液对光的吸收规律---光的吸收定律(朗伯-比耳定律),为吸光光度法提供了理论依据A=KcL。
紫外可见分光光度计的构造
分光光度计按波长范围分类,波长在420~700nm范围的称可见分光光度计。波长在200~1000nm范围的称紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度计是目前厂矿及学校应用比较广泛的分光光度计。分光光度计基本构造相似,是由图6-2所示的几个主要部件构成。
光源 单色器 吸收池
检测器
测量系统
三、步骤
1. KMnO4溶液的配制
称取高锰酸钾固体,置于烧杯中溶解,定容至1000mL,混匀,该溶液浓度约为·L-1。
2. KMnO4溶液吸收曲线的制作
用吸量管移取上述高锰酸钾溶液、、,分别放入三个100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,充分摇匀,各溶液KMnO4浓度分别为 mol·L-1、 mol·L-1、 mol·L-1。
将配制好的各浓度的KMnO4溶液,用1cm比色皿,以蒸馏水为参比溶液,在440~580nm波长范围内,每隔10nm测一次吸光度,在最大吸收波长附近,每隔5nm测一次吸光度。在坐标纸上,以波长λ为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制A和λ关系的吸收曲线。从吸收曲线上选择最大吸收波长λmax,并观察不同浓度KMnO4溶液的λmax和吸收
曲线的变化规律。