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1．(2018·安徽芜湖高三5月模拟)科研工作者欲将某抗盐基因导入原生质体培育抗盐大豆。请回答下列问题：
(1)为获得大量抗盐基因，可通过________技术进行扩增，该技术需要2种引物的原因是________________________。
(2)导入抗盐基因的叶肉细胞原生质体应放在________(填“高渗”“等渗”或“低渗”)溶液中。原生质体需再生出________，经脱分化获得________，再分化获得抗盐植株，该过程的原理是________________。
(3)利用带有标记的抗盐基因探针与______________进行分子杂交，检测抗盐基因在受体细胞中是否转录。个体水平上的检测抗盐基因是否成功表达的方法是________________________。
答案 (1)PCR DNA双链反向平行，复制时两条链均为模板 (2)等渗 细胞壁 愈伤组织 植物细胞的全能性
(3)从转基因植株提取的RNA 浇灌一定浓度的盐溶液(或移栽到高盐环境中进行实验) 解析 (1)扩增目的基因，可采用PCR技术。由于DNA双链反向平行，复制时两条链均为模板，因此PCR技术中需要两种引物。
(2)由于原生质体无细胞壁，将其放入高渗溶液中会失水，低渗溶液中会吸水涨破，因此导入抗盐基因的叶肉细胞原生质体应放在等渗溶液中。将原生质体培养成植株，需要再生出新的细胞壁，然后脱分化获得愈伤组织，再分化才能获得抗盐植株。脱分化、再分化的过程称为植物组织培养，其原理是植物细胞的全能性。
(3)检测抗盐基因是否转录，采用分子杂交技术，即利用带有标记的抗盐基因探针与从转基因植株提取的RNA进行分子杂交，如能形成杂交带，则说明抗盐基因在受体细胞中已转录。个体水平上检测抗盐基因是否成功表达，需要在个体水平上检测其是否能抗高盐环境，即给该个体浇灌一定浓度的盐溶液或移栽到高盐环境中进行实验，观察它的生长情况。
2．(2018·河南洛阳一模)苏云金杆菌是一种对昆虫有致病作用的细菌，其杀虫活性物质主要是一类伴孢晶体蛋白。某种苏云金杆菌产生的伴孢晶体蛋白含两条肽链，共由126个氨基酸组成，经昆虫肠液消化成毒性肽。我国农科院采用逆转录PCR技术获取大量伴孢晶体蛋白基因，然后将目的基因通过载体导入到植物体内，培育出抗虫农作物。请回答下列问题。
(1)PCR技术扩增目的基因，每一循环包括变性、________、________三步，一个目的基因通过PCR技术扩增，循环n次，需要________对引物。
(2)若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是____________________________(答出两点即可)。
(3)下图表示苏云金杆菌中质粒和目的基因所在的DNA中相关的限制酶的切割位点，在基因工程实际操作中，一般应选用__________________酶切质粒和含目的基因的外源DNA，这样
可以避免
______________________________________________________________________________________________________。
(4)如果将伴孢晶体蛋白基因导入二倍体植物，常用的方法是________________。 (5)种植上述转基因植物，它所携带的目的基因有可能通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。如果把目的基因导入叶绿体DNA中，就可以避免上述“基因污染”，因为叶绿体的遗传特点属于____________，目的基因不会通过花粉传递给下一代。
答案 (1)复性 延伸 2－1 (2)该目的基因无复制原点、无启动子
(3)PstⅠ和HindⅢ 目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接，目的基因被破坏，以及两种标记基因都被破坏
(4)农杆菌转化法 (5)细胞质遗传
解析 (1)在利用PCR技术扩增目的基因过程中，每一次循环都包括变性、复性和延伸过程。每合成一个新的子链就要消耗一个引物，因此扩增n次，产生2个DNA，去掉开始时的1个基因，所以共消耗2－1对引物。
(2)质粒载体中包括复制原点、启动子、终止子等结构，便于目的基因的表达。通过逆转录得到的目的基因没有这些结构。
(3)根据题图可知，在质粒和目的基因的两侧，都有PstⅠ和HindⅢ酶的识别序列，并且使用这两种酶目的基因不被破坏，能保证质粒中至少有一个标记基因能够正常表达，便于后期筛选，且可以使目的基因或质粒被这两种酶切割后产生的黏性末端不同，避免发生自身环化。
(4)将目的基因导入植物细胞的常用方法是农杆菌转化法。 (5)叶绿体中基因的遗传属于细胞质遗传。
3．(2018·山东烟台高考适应性练习)干扰素是动物和人体细胞受到病毒感染后产生的一种糖蛋白，具有抗病毒、抑制细胞增殖及抗肿瘤作用。利用基因工程技术培育能生产干扰素的植物流程如图所示。请回答下列问题。
nnn
限制酶 识别序列和切割位点 GATTC GATCC CCCGGG GGGCCC ↓↓↓↓EcoRⅠ BamHⅠ SmaⅠ ApaⅠ
(1)首先获取的动物干扰素基因称为________。利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是__________________________。
(2)过程①中剪切质粒和目的基因时所需要的工具酶是________和________。酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列________。
(3)过程②中将重组质粒导入根瘤农杆菌时，常用________处理根瘤农杆菌，其目的是________________________________________。
(4)在培育愈伤组织的固体培养基中，除了无机盐、有机营养物质、琼脂、植物激素外，还需添加卡那霉素。卡那霉素的作用是____________________。在分子水平上通常采用____________技术检测干扰素基因是否导入受体细胞。
答案 (1)目的基因 干扰素基因两端的部分核苷酸序列 (2)BamHⅠ EcoRⅠ 不相同
(3)Ca 使其成为感受态细胞，使质粒更容易进入细胞 (4)筛选出导入重组质粒的植物细胞 DNA分子杂交
解析 (1)在基因工程中，获取的动物干扰素基因称为目的基因。利用PCR技术扩增干扰素基因时，需要依据干扰素基因两端的部分核苷酸序列设计引物序列。
(2)题图显示：干扰素基因中存在SmaⅠ的识别位点，若使用SmaⅠ切割质粒和外源DNA，则会破坏干扰素基因，因此过程①所示的构建重组质粒时不能使用SmaⅠ切割。BamHⅠ和
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EcoRⅠ的识别位点位于目的基因的两侧，质粒上也有BamHⅠ和EcoRⅠ的识别位点，因此，过
程①中剪切质粒和目的基因时所需要的工具酶是BamHⅠ和EcoRⅠ。因BamHⅠ和EcoRⅠ的识别位点不同，所以酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同。
(3)过程②中将重组质粒导入根瘤农杆菌时，常用Ca处理根瘤农杆菌，使其成为感受态细胞，使质粒更容易进入细胞。
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