怎样做一张理想的琼脂糖凝胶电泳图
说起跑电泳,肯定有人嗤之以鼻:哎呀!这个跑电泳还不简单啊,做块胶,上个样,插上电源跑就是了。接下来将会向大家展示实验室这些年跑电泳所遇到的一些问题,并为大家分析不同电泳图的所代表的结果以及在如何解决这些问题,希望对大家做出理想(漂亮)的电泳图有所帮助。
一、做一块优质的琼脂糖凝胶
正所谓“工欲善其事,必先利其器”,能否做一块好的琼脂糖凝胶,直接影响到后面的电泳和结果的分析。新手一开始跑电泳的时候,会出现各种各样奇怪的图,如下图。
图一 图二
从图一上看,DNA电泳时,DNA条带好像遇到阻碍而发生了扭曲;图二中DNA亮带虽没有发生扭曲,但是却出现了杂斑亮带。这是因为在制胶时带入了其它杂质,形成了障碍物,使得DNA条带电泳时受到阻碍无法继续电泳,从而形成扭曲带
(如图一);或者是制胶时溶胶不完全以致琼脂糖颗粒残留,形成一些浓度较高的凝胶区域,在DNA电泳经过这些区域时,部分DNA被阻碍在这里而形成不规则亮带(如图二)。
所以建议在制胶时注意以下几点:
在制胶时必须将制胶模具、梳子以及烧杯等物品洗净,以免干胶及其他杂质带入;
在溶胶时应观察溶液中是否有未溶解的琼脂糖颗粒,确保溶胶完全;
在溶液倒入制胶模具前必须充分混匀,以免制出来的胶出现不均匀的现象。
二、选择合适浓度的琼脂糖凝胶
除了以上这种低级问题,还有一个容易忽略的问题,那就是凝胶的浓度。比如:
1:50bp DNA Ladder
(simgen,cat.No.MD1001)
2:100bp DNA Ladder
(simgen,cat.No.MD1002)
3:500bp DNA Ladder
(simgen,cat.No.MD1003)
4:1kb DNA Ladder
(simgen,cat.No.MD1004)
5:λHinding Ⅲ
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
图三 图四
以上这两幅图是用相同的DNA Ladder、上样量、电泳电压并且跑了一样长的时间时,为啥差别非常明显?哪里不一样呢?就是由于采用了不同浓度的凝胶电泳而导致的。那怎么选择合适浓度的琼脂糖凝胶呢?简而言之,长片段的DNA选用低浓度的凝胶电泳,短片段的DNA则选用高浓度的凝胶电泳--具体参考方案参考下表:
表一:分离不同大小的DNA片段所用的最适凝胶浓度