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分子生物学实验室常用仪器及使用方法 

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而测定某一溶液对该单色光的吸收值。分子生物学实验中常使用紫外分光光度计进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。下面介绍紫外可见光分光光度计GeneQantTM Pro(Amersham)的使用方法。该仪器除了能检测核酸样品浓度外,还可进行蛋白质浓度以及细胞培养液浓度的测定,能检测低至几微升样品(70μl和5~7μl),样品无需稀释,测量后还可全部回收。

使用方法

(1)打开电源开关(ON),等待数秒钟,显示屏上显示一系列数据,如本机型号、当前日期等,这些数据可以重新设置,当出现“instrument Ready”即可进入下一程序。

(2)在仪器面板上有许多功能键,其中包括检测base sep 、Tm、DNA、RNA、oligo、Protein595assay、Protein280 meas、cell culture等。例如,欲检测DNA, 按DNA键,即进入DNA检测程序。在显示屏上:

Pathlengh 10mm

Units μg/μl

Use 320nm NO

Dilution Faotor 1

Insert reference,

以上为仪器预设置的参考数据,若按“enter”键,和“select”键可以将以上的参数进行重新设定。

(3)取石英样品杯70μl或5~7μl ,容量大小根据需要。先用吸管吸高纯水入样品杯中,然后放入仪器上的样品槽中,放入时注意样品杯的光学面朝前方。

(4)按“set ref”键,进行空白测试。显示屏上出现一系列数据均“0.000”并提示插入样品“Insert sample ”。将样品杯取出,吸干水分,稍干燥后,同样吸入待测样品,放入样品槽中进行测定。

(5)一个样品测定完毕,按“stop”键,返回“Instrument Ready”。

(6)取出样品杯,吸出样品,然后用高纯水洗几次,自然晾干。由于样品杯十分昂贵,使用时要小心操作。不能用手指拿样品杯的光学面,用后要及时洗涤,可用温水或稀盐酸,乙醇以至铬酸洗液(浓酸中浸泡不要超过15分钟),表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净。

五、数字式酸度计

酸度计是实验室配置溶液必备的仪器。本实验室的酸度计为台式微电脑酸碱度计和温度计(Hanna),测量pH范围为0.00~14.00pH;温度为0.0~100.0℃;

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1. 使用方法

(1)将pH电极和温度探头与主机连接,主机与电源连接。

(2)取出电极保护套,如果有结晶盐出现,这是电极常见现象,浸入水后就会消逝。如果薄膜玻璃或透析膜发干,可在HI170300电极保存液中浸泡1小时。

(3)pH校准。将pH电极和温度探棒浸泡在所选的标准缓冲液内4cm(建议用pH6.86、7.01),缓冲液值可通过“D℃”或“?℃”键来调节。按“CAL”键,仪器将显示“CAL”和“BUF”符号及“7.01”数据。当读数不稳定时,屏幕会显示“NOTREADY”;当读数稳定时,屏幕会显示“READY”和“CFM”,按“CFM”键确认校准值。确认第一校准点后,将pH电极与温度探棒浸泡在标准缓冲液内4cm(建议用pH4.01、9.18、10.01);再按“CAL”键,仪器将显示“CAL”和“BUF”符号及“4.01”数据。按“CFM”键确认校正值。

(4)pH测量。校准完毕后,仪器自动进入pH测量状态,将电极与温度探棒浸泡在待测溶液约4cm,停几分钟让电极读数稳定。

2. 注意事项

(1)由于pH211酸度计内装有可充电电池,在刚购买或长时间放置后,再使用时,通电校正测量完毕后,可将电源继续还插入电源插座,只需关闭开关,这样可以保证电池充电,是校正值得以储存,下次测量时无须校正即可进入精确测量。

(2)不可用蒸馏水、去离子水和纯水浸泡电极。如果读数偏差太大(±1pH),则是由于没有校正或电极变干。为避免电极受损,在关机前要将pH电极从溶液中拿出。当处于关机状态时,在电极浸入电极保存液前,电极要与机器分开。

(3)如仪器已测过几种不同的样品溶液,请用自来水清洗,或在插入样品溶液前,用待测样品清洗电极。

(4)温度会影响pH的读数,为测量准确的pH值,温度要在适合的范围内进行自动温度补偿,用HI7669/2W温度探棒浸入样品中,紧靠电极并停几分钟,如果被测溶液的温度已知或测量是在相同温度下进行,只需动手补偿,那么此时温度探棒是不用连接,屏幕上会显示温度读数伴有℃信号闪烁。温度可通过“?℃”或“D℃”来调节。

六、PCR仪

PCR仪,也称DNA热循环仪、基因扩增仪,它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段,它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程。

PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域,如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等。随着分子生物学的不断发展,PCR扩增技术也得到普及推广应用,

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因此了解PCR仪的性能,熟练掌握仪器的正确使用方法及使用过程中的注意事项,将是十分必要的。

现介绍PCR 扩增仪(Tl Thermocycler)的使用方法和注意事项。

1. 使用方法

(1)接通电源开关,仪器进入准备状态;在显示屏上记录了当前仪器的温度和盖子(Lid)的温度。若仪器正在运行时,须按“ B ”键(start/stop),才能退出运行并返回准备状态。

(2)编写程序段。在准备状态下按“ C ”键(programs)进入编程状态,选定一程序号,然后按“enter”键,进入下一程序;按 “A”(list)键后,选一文件号(empty program);再按“enter”键,进入下一程序;按“ABC”键,进入下一程序,用上下左右键号选择一个字母(A、B、C、D、?),然后按“enter”键,进入下一程序;按“name ok”键,完成文件命名。

(3)设定盖子的温度。“lid temp: ℃”,盖子的温度一般比变性温度要高10℃,例如变性温度是95℃,那么盖子的温度就要设定为105℃。待盖子预热后按“enter”键,进入下一程序。

(4)设定变性温度、变性时间、延伸温度、延伸时间、退火温度、退火时间及循环总数等参数。从第一步依次按“enter”键进入,用四个移位键移动设定位置。先设定温度,后设定时间,全部参数设置完后,按“pgm ok”键,所设定的程序自动被保存。

(5)运行程序。检查设定是否正确, 按“start”键,选择设定好的程序,开始运行。显示屏上可观察到系统运行的情况,按“Stop”可停止运行。

七、凝胶成像系统

本系统属全自动电脑控制影像分析系统,主要拍摄核酸的agarose电泳胶片,及蛋白质的acrylamide电泳胶片。在与markers比较后,可精确计算样本的分子量,对核酸电泳也可准确定量,是分子生物学及生化蛋白试验的重要检测工具。本系统包括暗箱,紫外透射仪,摄像头,变焦镜,电脑以及专业凝胶图象采集及分析.软件(3.3版)。该软件提供对电泳凝胶、斑点测量、PCR密度的定量分析等。此外,还提供图像采集、标注、打印、数据和图像发送到Word、Excel、图像处理等功能。

1.使用方法

(1) 打开电脑,启动凝胶分析软件,进入用户界面。

(2)打开采集凝胶图像的暗箱装置电源开关,放入凝胶,打开紫外光源或白光光源,将采集装置与电脑上采集卡相连,然后选择“文件”菜单中的“图像采集”或工具栏的“图像采集”按钮,出现图像窗口:“开始采集”、“停止采集”、“采集图像”等。如果图像不清晰,可以调节暗箱上的变焦镜,使之清晰。可直接将图像保存起来,也可通过“图像处理”

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对图像进行旋转、裁剪、滤波、调节对比度??方面的处理。

(3)对读入的电泳凝胶图像,可以启动电泳凝胶分析系统。在“功能选择”菜单中选择“电泳凝胶”或在工具栏上的“电泳凝胶”工具,将出现泳道分析工具栏,并在“图像显示”子窗口中出现一个红色的矩形框。还可进入“条带分析”系统,对条带 进行编号,对二条以上的条带进行比较。

(4)采集图像结束后,关闭暗箱电源开关,从暗箱中取出凝胶,并将玻璃板清洗干净,晾干。

八、空气恒温摇床

摇床(振荡器)为实验室的常规设备。SHK-99-Ⅱ型台式空气恒温摇床,采用微电脑控制系统,温度范围:室温+5℃~60℃,精度±0.5℃;时间范围:1分钟~99小时59分钟;转速范围:60RPM~250RPM。

1.使用方法

(1)LED屏幕上各段数据:

RPM Temp Time

1 000 00.0 00:00

屏幕上“1”表示第一段,如果是第二段则为“2”,“Temp”表示温度,“RPM”表示每分钟转速,“Time”表示时间,不设定时可自动累计时间一直运行。“Temp”、“RPM”、“Time”的值随时可以修改,随时按新值运行。

(2)工作程序设置。按“F1”键,进入设置状态。可在速度,温度,时间,运行等四部分之间切换。在每一部分按“F2”键输入数据,输入完十位数据,再输入个位数据,按“F2”键,再按“F2”键,到小数位,再按“F2”键,又到十位,以此循环。

(3)再按“F1”键,转回运行状态,按“Start”键,电机开始运行,时间开始计时。

(4)按“End”键,结束系统运行。

2. 注意事项

(1)打开电源,系统开始自检,等待LCD屏幕出现“WELCOME”字样,系统自检完毕,可以进行第2步参数设置。若屏幕出现:a.“TEMP ERROR”,表示温度检测线路有错误;b.“MOTOR ERROR”,表示电机部分有错误。

(2)运行过程可以打开箱盖,这样电机不运行,时间也停止,盖上盖接着运行。

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(3)工作完毕,关闭电源。关机后,要等一段时间再开机。

九、水的净化装置

分子生物学实验对水的纯度要求越来越高,一般蒸馏水常常难以满足实验要求,大多要求要进行第二次蒸馏(双蒸水),它可以去除水中的大部分有机杂质,但制作时间较长,而且无机杂质还是很多。许多实验还需要去离子水,这就需要阴阳离子交换树脂进行处理。目前,分子生物学实验室都使用高质量的超纯水。如美国微孔滤膜公司的Milli-Q超纯水制造系统所制造的超纯水适用于许多学科领域,如分子克隆、各种色谱分析、氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等实验。下面介绍RO-MB壁挂式反渗透高纯水机性能及使用方法。RO-MB反渗透高纯水机(杭州永洁达)产水量(25℃)10L/H;产水水质:RO纯水:<10μs/cm,高纯水:>15MΩ.cm;可用自来水制成普通实验用水和高纯水,同时满足不同水质要求。在线电导率仪对产水水质连续检测,可保证产水质量。

1. 使用方法

(1)准备:先检测与纯水机相连的原水管路、废水管路连接是否正常,打开原水阀门。供电电源是否正常,检查按钮是否在关闭状态(按钮弹出状态)。将电源插头插入带有接地线的220V电源插座上。

(2)开机:依次按下电源开关,泵开关,纯水机启动产水,同时废水排出,指示灯亮起,并处于自动运行状态。

(3)取纯水:若打开RO纯水或高纯水出口阀门,则可获得相应水质的纯水。当高纯水出口阀门打开时,检测仪表显示高纯水电导率或电阻值。为了获得高质量的高纯水,可以先放掉一杯水后再取新鲜水。

(4)关机:不用时可关闭个按钮停机,自来水进水阀门不必关闭,这时机子内部的进水电磁阀已自动切断水路。只要管路阀门不漏,也可使机子保持自动待机状态。

2.注意事项

(1)纯水机的正常使用环境温度为15~35℃,产水量会随温度降低而下降,冬季保养温度不低于5℃。

(2)预处理滤芯一般三至六个月更换一次,实际使用寿命与自来水水质、总过滤量等有关。

(3)混床滤芯产高纯水约1~3吨,约二至四个月更换一次,实际使用寿命与自来水水质、水中含盐量、总用水量等有关。设备停运时间超过2天。必须注意定期冲洗维护。夏季宜每天开机30分钟冲洗一次,冬季每隔2~3天开机冲洗一次。

(4)使用过程若发现停机后泵仍频繁地每隔数分钟有规则地启动数秒钟又停机,此为管路漏水引起,需及时打开机箱加以解决。若每隔半小时以上启动数秒钟又停机,乃属正常现

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分子生物学实验室常用仪器及使用方法 

而测定某一溶液对该单色光的吸收值。分子生物学实验中常使用紫外分光光度计进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。下面介绍紫外可见光分光光度计GeneQantTMPro(Amersham)的使用方法。该仪器除了能检测核酸样品浓度外,还可进行蛋白质浓度以及细胞培养液浓度的测定,能检测低至几微升样品(70μl和5~7μl),样品无需稀释,测量后还可全部回收。使用方法(
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