实验三 实验动物基本操作技术
学习目标
?
熟悉大鼠、小鼠及家兔的捉拿与固定；熟悉小鼠腹腔注射、家兔耳
缘静脉注射的方法与技术；熟悉动物的编号方法。 ?
了解其他动物实验技术。
大多数药理实验是以动物为实验对象的，常用实验动物有青蛙与蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔，猫，狗等，实验前了解其特点，掌握常用的动物实验基本操作技术，有利于学生动手能力的培养。本节重点介绍青蛙与蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔的实验基本操作技术。
一、实验动物的编号
为了分组和辨别的方便，实验时常需对实验动物进行编号。常用的编号方法如下：
1．染料标记法
（1）常用染料：红色染料：5％中性红或品红液；黄色染料：3％～5％苦味酸溶液；咖啡色染料：2％硝酸银溶液；黑色染料：煤焦油的酒精溶液。 （2）标记规则：根据实验动物被毛颜色的不同选择不同化学药品涂染动物。 A.家兔等动物的标记方法：一般用毛笔蘸取不同颜色的染料溶液直接在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂写，则需在日光下暴露1min。
B.大鼠、小鼠的标记方法：通常在动物不同部位涂上有色斑点来表示不同的号码。 如需要对数只实验动物编号，将小白鼠背部划分为前肢、腰部、后肢的左、中、右部九个区域，从右到左标记。
2．穿耳打孔法 用专门的打孔器在动物耳朵的不同部位打孔表示。 3．挂牌编号法 此法常用于狗、猴、猫等大动物的编号。将号码牌固定于动物的颈圈或耳上。
4．人工针刺号码法 先将动物被毛去除，用针在动物皮肤上刺出号码，再用酒精墨汁涂染即可。
二、实验动物的捉拿与固定方法
1．蛙和蟾蜍 用左手握住动物，以食指按压其头部前端，拇指按压背部。 2．小白鼠 捉拿法有二种，一种是用右手提起尾部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后上方轻拉，此时小鼠前肢紧紧抓住粗糙面，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠颈背部皮肤并用小指和手掌尺侧夹持其尾根部固定手中；另一种抓法是只用左手，先用拇指和食指抓住小鼠尾部，再用手掌尺侧及小指夹住尾根，然后用拇指及食指捏住其颈部皮肤。
3．大白鼠 捉拿时，右手抓住鼠尾基部（因抓尾尖动物会扭动易使其尾部的皮肤脱落，影响实验的进行）将大鼠放在粗糙面上，左手戴上防护手套或用厚布盖住大鼠，抓住其整个身体并固定其头部以防咬伤。捉拿时勿用力过猛，勿捏其颈部，以免引起窒息。
4．豚鼠 捉拿时以拇指和中指从豚鼠背部绕到腋下抓住豚鼠，另一只手托住其臀部。体重小者可用一只手捉拿，体重大者捉拿时宜用双手。
5．家兔 捉拿时一手抓住其颈背部皮肤。轻轻将兔提起，另一手托住其臀部，根据实验需要进行固定。如作兔耳血管注射时，可用兔盒固定；如要做腹部注射、手术及测血压等实验时需将家兔固定在兔手术台上。其方法为：
（1）头部的固定：用特制的家兔头夹。兔头夹为附有铁柄的半圆形铁圈和一可调铁圈。一般动物取仰卧位固定时，先将麻醉好的兔颈部放在半圆形的铁圈上，再把其嘴伸入可调铁圈内，最后将兔头夹的铁柄固定在实验台上。或用一根粗棉绳，一端拴住动物的两个上门齿，另一端拴在实验台的铁柱上。做颈部手术时，可将一粗注射器筒垫于动物的项下，以抬高颈部，便于操作。若动物取俯卧位固定，特别是在头颅部实验中，常用马蹄形头固定器固定。
（2）四肢的固定：一般在头部固定后，再固定四肢。先用粗棉绳的一端缚扎于踝关节的上方。若动物取仰卧位，可将两后肢左右分开，将棉绳的另一端分别缚在手术台两侧的木钩上，而前肢须平直放在躯干两侧。再将绑缚左右前肢的
两根棉绳从其背后交叉穿过，压住对侧前肢小腿，分别缚在手术台两侧的木钩上。固定的姿势依手术或实验种类而定。如进行颈、胸、腹、股等部的实验，多采取仰卧位，脑和脊髓实验则常选用俯卧位。
三、实验动物的给药方法 1. 经消化道给药（灌胃法）
（1）小白鼠灌胃法：将小白鼠放在粗糙面上，左手拇指和食指捏住小鼠颈背部皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手掌上，使小鼠腹部朝上，注意使口腔和食管成一直线。右手持灌胃针管（1～2ml注射器上连接12～16号注射针头，尖端部磨钝，针头长4～5cm，直径约为1mm）从小鼠口角插入口腔内，然后用灌胃管轻压小鼠头部，经舌面紧贴上腭进入食管，进针2～3cm后，此时动物安静并无呼吸异常，即可将药注入。如遇阻力或动物憋气时则应抽出重插，不能强插以免刺破食管或误入气管使动物死亡。药液注完后轻轻退出灌胃管。操作时应动作轻柔，细致以防损伤食道及膈肌。灌药量一般为0.1～0.3ml/10g体重。
（2）家兔灌胃法：用兔固定箱，可一人操作。右手将开口器固定于家兔口中，舌压在开口器下面，左手将导尿管经开口器中央小孔插入。如无兔固定箱，则需两人协作进行，一人就坐，腿上垫好围裙，将兔的躯体夹于两腿间，左手紧握双耳，固定其前身，右手抓住其两前肢。另一人将开口器横放于兔上下颌之间，固定在舌面上,将导尿管自开口器中央的小孔插入，慢慢沿家兔口腔上腭壁插入食道约15～18cm。插管完毕将胃管的外口端放入水杯中，切忌伸入水过深。如有气泡从胃管逸出，说明不在食道内而是在气管内，应拔出来重插。如无气泡逸出，则可将药推入，并以少量清水冲洗导尿管保证管内药液全部进入胃内。最后缓慢拔出导尿管。
2.注射给药法
（1）皮下注射：小白鼠:通常在背部皮下注射。注射时以左手拇指和中指将小白鼠颈背部皮肤轻轻提起，食指轻按其皮肤，使其形成一个三角形小窝，右手持注射器从三角窝下部刺入皮下，轻轻摆动针头，如易摆动时则表明针尖在皮下，此时可将药液注入，针头拔出后，以左手在针刺部位轻轻捏住皮肤片刻，以防药
液流出。药量一般为0.1ml～0.3ml/10g体重。
大白鼠:注射部位可在背部或后肢外侧皮下，操作时轻轻提起注射部位皮肤，将注射针头刺入皮下后推注药液。一次注射量不超过1ml/100g体重。 家兔:可在背部或颈部注射，方法参照小鼠皮下注射法。针头应选用稍大（6～7号），给药量一般为0.5～1.0ml/kg体重。
（2）腹腔注射法：小白鼠: 左手固定动物，使腹部向上，头呈低位。右手持注射器，在小白鼠下腹部腹白线稍向左或右的位置，从下腹部朝头方向刺入皮肤，针头到达皮下后， 沿皮下向前推进3～5mm，然后使注射器针头与皮肤呈45度角刺入腹腔。 针头刺入腹腔后感抵抗力消失，此时在保持针头不动的状态下回抽针栓，如无回血或尿液，则可推入药液。一次可注射量为0.1～0.2ml/10g体重。切勿使针头向上注射，以防针头刺伤内脏。
大白鼠、家兔等: 可参照小白鼠腹腔注射法。但应注意家兔在腹白线两侧注射（应在离腹白线约1cm处进针）。较少用，但当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时可用。
（3）肌肉注射法：小白鼠、大白鼠:一般因肌肉少，不作肌肉注射，如需要时，可将动物固定后，一手拉直动物左或右侧后肢，选用针头5～7号，将针头刺入后肢大腿外侧肌肉内，小鼠一侧药液注射少于0.4ml。
家兔:选择两臂或股部。固定动物，右手持注射器，使其与肌肉成45度角一次刺入肌肉中，先抽回针栓，无回血时将药液注入，注射后轻轻按摩注射部位，帮助药液吸收。
（4）静脉注射法：小白鼠：一般采用尾静脉注射。注射前先将动物固定于固定器内，使其整个尾部外露，以右手食指轻弹尾尖部，必要时可用45～50℃的温水浸泡尾部1～2min或用75％乙醇擦拭尾部，使其全部血管扩张充血。以拇指与食指捏住尾根部两侧，无名指和小指夹持尾尖部，中指从下托起尾巴固定。选择一根最为充盈的血管（一般选择尾两侧静脉，针刺宜从尾尖端开始，渐向尾根部移动，以备反复应用），右手持4号针头使其与尾部呈30度角刺入静脉，针头在静脉内平行推进少许，左手三指连针头和鼠尾一起捏住固定，以防动物活动时针头脱出。推动药液无阻力、并可见沿静脉血管出现一条白线说明针头在血管
内，即可注药。如遇到阻力较大，局部发白变硬时，说明针头不在静脉内，需拔出针头重新穿刺。注射完毕后拔出针头，轻按注射部位止血。一般一次注射量为0.05～0.2ml/10g体重。大鼠亦可舌下静脉注射或待其麻醉后，切开其大腿内侧皮肤进行股静脉注射，也可颈外静脉注射。
家兔：家兔静脉注射一般采用耳缘静脉。注射前先剪除其表面皮肤上的毛并用水湿润局部，血管即显现出来。可先轻弹或用酒精棉球揉擦耳尖部并用左手食指和中指轻压耳根部，拇指小指夹住耳边缘部分，以左手无名指放在其下作垫，待静脉显著充盈后，右手持带有6～8号针头的注射器刺入静脉（第一次进针点尽可能靠远心端，以备反复应用），顺着血管平行方向深入1cm后，放松对耳根处血管的压迫，左手拇指和食指移至针头刺入部位，将针头与兔耳固定 针头刺入血管后再稍向前推进，轻轻推动针栓，若无阻力和局部皮肤发白、隆起现象，即可注射药物，否则应立即拔出针头，在原注射点的近心端重新刺入。注射完毕，用棉球压住针刺孔拔出针头。
【思考题】
1．在做动物实验时，小白鼠腹腔注射、家兔的静脉注射的基本操作步骤与
实验三 实验动物基本操作技术
