一种微生物复合菌剂的生产工艺流程及设计要求
（附简图)
一．生产前的准备工作
（1）生产用菌种的鉴定:主要包括纯度鉴定，生产性能的检查，有无杂菌污染。还有就是菌种的活性，重要特性有无退化等。 （2）如菌种已发生功能性改变或被杂菌污染，还需要进行菌种的纯化或或复壮。
（3）其次在规模生产之前，还要通过实验室中试，确定该菌群的最适生长温度，PH，发酵培养基的最适成分与比例；生长曲线的绘制与最适培养时间的确定。我们一般选取对数生长期的菌体（丝）做为生产发酵用的菌种。最佳接种量与装液量的控制。 二．实验室菌种的活化与种子培养阶段：
（1）将冷冻保藏管中的菌种在斜面中活化（37℃ 24h），并在平板
中进行纯化（37℃ 24h）。最终得到斜面菌种或菌种斜面。 斜面培养基成葡萄牛肉蛋白Nacl 琼脂 份 组成比例 糖 0.1% 膏 1% 胨 1% 0.5% 2.0-2.5% 7.0-7.2 PH （2）摇瓶培养阶段: 取一环纯化后的的菌种，接入装量为20mL种子培养基的250mL三角瓶中，置于180r/min中摇床中培养 (37℃ 18h)。 分别取1mL的种子液 ,接入五个盛有20mL发酵培养基的250 mL 三角瓶中。置于180 r/ min摇床中 培养（37℃ 24h） 。接种量为三
1
角瓶实际培养基装量的4-5%.PH控制在7.0-7.5之间。 培养基组成见下表： 摇瓶种子葡萄培养基成糖 分 各组成成2.5 0.5 0.04 分比例（%） （注；1ppm=1mg/l)
三．生产车间多级种子罐发酵阶段：
工艺流程 工艺条件 中控
121℃~125℃ 蒸汽 0.103MPa~0.168 MPa 全部设备灭菌 0.5h~1.0h 种子罐 一级种子罐培养基 加料体积50%~75%，实际为60% 配料 一级种子罐 PH6.5~7.5 PH值检测 精密试纸或PH计
121℃~125℃
一级种子罐灭蒸汽 0.103MPa~0.168 MPa
菌 0.5h~1.0h
灭菌空气 一级种子罐降25℃~35℃
温 常压
2
磷酸尿素 硫酸氢二镁 钾 0.1 2.5-3.5 2ppm 2ppm 7.0 玉米浆 亚铁 锰 硫酸硫酸PH
摇瓶菌种 灭菌空气 消泡剂 一级种子罐接种 物料量的0.5-5%.实际接种量为1%
一级种子罐发酵 25℃~35℃ 24~36h
镜检：
菌体的形态、密度 芽孢形成率≧80% 搅拌转速：180r/min
二级种子罐重复上述操作和参数控制
其中，由摇瓶菌种向一级种子罐的接种量，控制在一级种子罐实际装料量的0.5%-5.0%;PH控制在6.5-7.5;发酵温度控制在25℃
~35℃；装料量控制在种子罐公称容积的60%左右。搅拌转速控制为180r/min.
二级种子罐的具体工艺操作和参数控制和一级种子罐大体相同。
二级种子罐培养基成分应尽可能的接近主体发酵罐培养基成分。 通过上述二级种子罐发酵培养，我们大致可以得到450L的发酵种子液。（计算如下：0.6*0.01*V=0.225L由此可得V=37.5L即通过一级种子发酵，我们可以得到22.5L的发酵菌体或菌丝。二级种子罐的接种量为5%。即0.6*0.05*V=22.5L)即V=750L.即通过二级种子发酵，我们大致可以得到450L的二级种子发酵液。 二级种子罐培养基成分如下表
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一种微生物复合菌剂的生产工艺流程及详细设计要求剖析
