C2株蓝氏贾第鞭毛虫 SU MO特异性蛋白酶基因的克隆、
生物信息学分析及其催化活性区的原核表达
李少东;周英斌;刘晓莉;禇晗;李思瑾;田喜凤;王洋
【期刊名称】《中国人兽共患病学报》 【年(卷),期】2015(000)003
【摘要】目的：克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ，简称贾第虫）的SUMO‐Specific Protease（SENP）基因，并对其序列进行生物信息学分析，原核表达贾第虫SENP的催化活性区。方法提取C2株贾第虫基因组DNA ，以基因组DNA为模板获得SENP编码区全长片段，连入克隆载体pGM‐T ，测序后进行生物信息学分析；根据分析结果克隆SENP的催化活性区，构建其原核表达载体pET‐28a（＋）‐SENPc ，在 E ．coli Rosetta（DE3）中诱导表达，SDS‐PAGE及Western blot观察表达结果。结果成功克隆了C2株贾第虫SENP编码区全长序列，生物信息学分析显示C2株贾第虫SENP蛋白序列与WB株相同，二级结构以无规则卷曲为主，其催化活性区位于126‐497aa ，被一段插入序列分割成两个部分；构建了SENP催化活性区原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达，在相对分子量约43 kD的位置出现目的蛋白条带，与理论值相符。结论成功克隆了贾第虫SENP基因并原核表达了其催化活性区，为贾第虫SENP蛋白功能的研究提供了基础。%SUMOylation is a post‐translational
modification
involved
in
various
cellular
processes .SUMO‐specific protease (SENP) regulates SUMOylation by removing SUMO from conjugated substrates (deSUMOylation) and promoting maturation of SUMO precursor .In order to express Giardia
C2株蓝氏贾第鞭毛虫 SU MO特异性蛋白酶基因的克隆、生物信息学分析
