9) 简述Northern印迹杂交的基本原理及其应用？ 10) 简述Western印迹的基本原理及其主要步骤？ 11) 简述Sanger碱基顺序分析法的基本原理？
12) 简述酵母双杂交技术的基本原理和在基因工程中的应用？ 13) 简述酵母单杂交技术的基本原理和操作过程？ 14) 什么是噬菌体展示技术？简述其基本操作过程？ 15) 什么是DNA迁移率变动试验？简述其基本原理？ 16) 什么是DNase I足迹实验？简述其基本原理？
Chapter Ⅴ Polymerase Chain Reaction Technology and Application 1) 什么是PCR技术？简述其基本原理？ 2) 简述PCR 反应体系的主要成分与反应流程？ 3) 简述PCR引物设计的目的和一般原则？ 4) 简述提高PCR反应特异性的因素和措施？
5) 什么是巢式PCR、降落PCR、反转录PCR？它们分别有哪些应用？ 6) 简述荧光定量PCR的基本原理？为什么在定量PCR中要引入Ct值的概念？
Chapter Ⅵ RNAi and miRNA regulation 1) 什么是RNA干扰技术？
2) 简述利用RNA干扰技术沉默基因的基本原理和一般操作流程？ 3) 什么是siRNA？如何选择siRNA靶位点？ 4) 简述获得siRNA的途径有哪些？
Chapter Ⅶ Obtaining of target gene
1) 目的基因克隆时常用哪些方法分离和获得基因？
2) 什么是基因文库？简述构建基因文库常用的载体有哪些？ 3) 什么是基因组文库？ 简述构建基因组文库的一般步骤？ 4) 什么是cDNA文库？简述构建cDNA文库的主要步骤？
5) 目的基因与载体的连接方法有哪些？各有哪些优点？基因重组时在两个酶切位点中其中有
一个不相匹配时，你如何解决连接问题？
6) 如果目的基因的基因结构中有内含子存在，而且要采用原核表达系统，你应如何分离克隆
基因？
Chapter Ⅷ Recombination and gene transfer 1) cDNA克隆较之基因组克隆的优越性体现在哪里? 2) 试述T-A克隆法的原理和用途？ 3) 基因工程宿主菌必需具备哪些特性？
4) 名词解释：受体细胞、感受态细胞、转化、转染、转导 5) 简述将重组DNA导入原核细胞的方法有哪些？ 6) 简述将重组DNA导入真核细胞导的方法有哪些？ 7) 外源基因导入植物的方法？
8) Ti 质粒的结构特点？Ti 质粒介导植物基因转移的过程？
Chapter Ⅸ Screening and identification of recombinant clones 1) 如何从所克隆到的基因重组载体中鉴定目的基因的存在和正确性 2) 重组子的筛选与鉴定主要有哪些方法？ 3) 重组子的遗传学检测法主要包括哪两类？
4) 简述根据载体表型特征进行重组子筛选的常用方法及其基本原理？ 5) 如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？ 6) 名词解释：插入失活效应
7) LacZ 基因通常用于构建质粒载体的目的和原理？如何利用LacZ标记基因筛选阳性克隆？ 8) 报告基因检测法筛选重组子对报告基因有哪些基本要求?举例说明重用的报告基因有哪几
种？
Chapter Ⅹ Expression of cloning gene
1) 大肠杆菌作为基因工程受体菌有哪些优缺点？
2) 实现真核基因在大肠杆菌表达系统的正确表达需要哪些基本条件？ 3) 名词解释：启动子、终止子、SD序列、包涵体 4) 蛋白质包含体复性的方法有哪些？
5) 可使外源基因在大肠杆菌中高水平表达的启动子应具备哪些条件？
6) 常用大肠杆菌表达载体有哪些？简述λPL启动子表达载体和T7噬菌体RNA聚合酶/启动子
表达载体的主要特征？
7) 原核表达系统常采用的启动子有哪些？ Lac、Tac、trp启动子各自有何特点？ 8) 在大肠杆菌中表达外源基因的表达载体需具备哪些条件？
9) 利用大肠杆菌进行外源蛋白质主要有哪几种表达部位？采用相应表达形式有何优缺点？ 10) 名词解释：融合基因、融合蛋白
11) 提高外源基因表达效率一般从那几个方面进行考虑？
12) 从提高转录启动效率及翻译起始效率角度考虑，可通过哪些措施构建高效率表达载体，提
高外源基因表达效率？
13) 避免外源基因表达蛋白被宿主细胞内源蛋白水解酶降解的主要措施有哪些？ 14) 简述大肠杆菌表达外源基因产物的检测方法有哪几种？
15) 与原核细菌相比，酿酒酵母做为外源基因表达受体菌有哪些优点？ 16) 酵母表达系统有哪些优缺点？
17) 酵母基因表达系统主要有哪些基本结构？常采用的选择标记基因有哪些？ 18) 简述酵母表达载体的种类和主要特征？ 19) 甲醇酵母表达系统的主要特点？ 20) 酵母DNA转化的方法有哪几种？
21) 酵母菌的蛋白修饰分泌系统有哪些功能？对外源基因的蛋白表达有何作用？
根据课堂讨论题目扩增思考题目
1) 基因芯片技术的概念、原理和主要的应用？ 2) 基因治疗的概念与策略？基因治疗的基本程序？
3) 转基因动物的概念，显微注射法制备转基因动物的主要过程 4) 何谓动物克隆技术？有何应用价值？
基因工程原理与技术思考题
