屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的研究
金东;于波;叶长芸;刘凯;侯雪新;孙渭歌;徐建国;李振军
【期刊名称】《中国人兽共患病学报》 【年(卷),期】2013(029)006
【摘要】To establish TaqMan real-time PCR assay of Enterococcus faecium and provide reliable technical basis for clinical application , we designed the primers and probe of Enterococcus faecium according to ddl gene and detected the specificity in common pathogens and conditioned pathogens . The target gene was cloned to pMD18-T vector to build the standard curve of this method . We made the ascites simulation specimens with the concentrations from 1 .6×10° -1 .6×108 cfu/mL by 10 series dilutions of Enterococcus faecium strain and mixing well with sterile ascites to evaluate the application in clinical lab . The target gene was positive in Enterococcus faecium standard strain and clinical isolates but negative in other pathogens and condi -tioned pathogens by TaqMan real-time PCR assay . According to the standard curve , we acquired the sensitivity of this method was 20 copy/reaction . The stability evaluation indicated that the inter and intra-assay coefficients of variability werel .52% -1.69% and 1 .90% -3 .91% , respectively . The sensitivity of TaqMan real-time PCR assay of the ascites simulation specimens was 1 .6×102 cfu/mL . In conclusion, the TaqMan real-time PCR assay developed in our study could be used in
the detection of Enterococcus faecium in ascites specimens .%目的 建立屎肠球菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法.方法 根据屎肠球菌的ddl基因设计TaqMan荧光定量PCR特异的引物及探针,在多种常见致病菌及条件致病菌中检测其特异性;将目的 基因克隆到pMD18-T载体中建立标准曲线,检测方法的灵敏度和稳定性;使用腹水模拟标本验证方法的应用性.结果 在特异性评价中,除了阳性对照外其余菌株均未见特异性扩增曲线.建立屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线,确定本方法对质粒标准品的检测下限为20copy/管.通过对1.0×107、1.0×105和1.0×1033个浓度质粒标准品的重复检测,确定屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的组内变异系数为1.90%~3.91%;组间变异系数为1.52%~1.69%.应用屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法对含菌量为1.6×100~1.6×108cfu/mL浓度梯度的腹水模拟标本进行检测,其检测灵敏度为1.6×102cfu/mL.结论 本研究建立了屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法. 【总页数】5页(551-555)
【关键词】屎肠球菌;TaqMan荧光定量PCR;标准曲线 【作者】金东;于波;叶长芸;刘凯;侯雪新;孙渭歌;徐建国;李振军
【作者单位】中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206;中国疾病
预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,102206 【正文语种】中文 【中图分类】R378.1 【文献来源】
https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_chinese-journal-zoonoses_thesis/0201231688892.html 【相关文献】
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