XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 1. 分析原理 E 170/e 601/e 411 Toxo IgM (Toxo IgM) 文件编号：LAB－OP－MY020 1 页，共 第 5 页 版本：A/0 生效日期：2008-02-01 采用μ捕获法，整个过程18分钟完成。 1) 第1步：10 μL标本自动用通用稀释液1：20稀释、生物素标记抗人IgM 抗体，钌（Ru）标记的重组弓形虫抗原形成夹心复合物。 2) 3) 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。仪器通过2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。 2. 标本要求 血清：按标准常规方法采集。 血浆：肝素（锂、纳）、EDTA-K3、枸橼酸钠抗凝均可。如用枸橼酸钠抗凝，结果应+10%。 标本在18C ?23C可稳定1周，在2C ?8C可稳定8周，-20C可稳定6个月。只能冻融5次。含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控液禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。 3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料 采用罗氏原装配套试剂。 试剂： ?M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：?470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：生物素标记抗人IgM 抗体, RLP（灰盖），1瓶，9ml。浓度大于0.4mg/l，磷酸缓冲液 0.1mmol/l，pH7.0。含防腐剂。 R2：钌（Ru）标记的重组弓形虫抗原（黑盖），1瓶，9ml。浓度大于0.4mg/l，磷酸缓冲液0.1mmol/l，pH7.0。含防腐剂。 校准品：（试剂盒附带） oo ooo
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 E 170/e 601/e 411 Toxo IgM (Toxo IgM) 文件编号：LAB－OP－MY020 2 页，共 第 5 页 版本：A/0 生效日期：2008-02-01 Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1.0ml/瓶,人血清基质 Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶,人血清基质 质控品： Elecsys PreciControl Roxo IgM 货号04618866190 其他所需材料： 常规实验设备 Elecsys E 170/E 411 Elecsys 系统清洗液（SysClean）,货号11930346122 Elecsys E 170分析仪所需材料: Elecsys 系统缓冲液 （ProCell M）,货号04880340190 Elecsys 检测池洗液（CleanCell M）,货号04880293190 Elecsys 样品稀释液（Universal Diluent），货号11732277122 Elecsys PC/CC杯,货号03023141001 Elecsys 清洗液（ProbeWash M），货号03005712190 Elecsys 反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号12102137001 Elecsys 系统清洗适配器（SysClean Adapter M），货号03027651001 Elecsys E 411分析仪所需材料: Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号11662988122 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），货号11662970122 Elecsys 样品稀释液（Universal Diluent），货号11732277122 Elecsys 系统清洗液（SysWash），货号11930346122 Elecsys 适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159001 Elecsys 反应杯（CUP），货号11706802001 Elecsys 加样头（TIP），货号11706799001 4. 仪器和校准 使用仪器：罗氏公司生产Elecsys 2010/E 170/e601/e 411全自动电化学发光免疫自动分析仪
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 E 170/e 601/e 411 Toxo IgM (Toxo IgM) 文件编号：LAB－OP－MY020 3 页，共 第 5 页 版本：A/0 生效日期：2008-02-01 仪器校准：每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。另外，以下情况需要再次定标： 校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天。 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；更换某些试剂时，根据规定进行多次标定。 5. 操作步骤 参见仪器标准操作规程。 6. 质量控制 用质控品1和质控品2，至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 7. 计算方法 仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数形式（标本信号/ Cutoff）报告。 8. 结果解释 阴性 灰区 阳性 9. 分析性能 精密度： < 0.8 COI 0.8 COI— 1.0 COI ≥ 1.0 COI 以下列出了此试剂盒在Elecsys仪器上的表现。每个实验室结果会不同。重复性测定采用的是美国临床化学实验室标准委员会修订稿EP5-A标准方法进行评估，使用了Elecsys试剂及人血清池、质控进行测定：连续测定10天，每天测定6次（n＝60次）；E170的批内重复性共测定了21次。结果如下：
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 E 170/e 601/e 411 Toxo IgM (Toxo IgM) 文件编号：LAB－OP－MY020 4 页，共 第 5 页 版本：A/0 生效日期：2008-02-01 10. 干扰因素 该方法不受黄疸（胆红素<25mg/dl）、溶血（血红蛋白<2.4 g/dl）、脂血（脂质<1500mg/dl）生物素<50ng/ml等干扰，接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子（1500U/ml）和透析的干扰。异常病人应结合病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 11. 临床意义 弓形虫病是由一种弓形虫寄生引起的感染，是最普遍的人兽共患寄生虫病之一。对于孕妇，特别是怀孕早期（前三个月）的孕妇来说，弓形虫的感染将对胎儿造成十分严重的危害，可以导致流产，死胎和畸胎等。感染前1－2星期产生的主要免疫球蛋白是IgM，并很快到达峰值，在感染6－9个月几乎检测不到。在感染早期免疫球蛋白IgG浓度很低，在感染3－4个月后达到最大值，随后逐渐下降，当再次感染免疫后，其在血清中持续存在数十年。检测IgM用于诊断弓形虫的急性感染，而检测IgG可以说明存在弓形虫的感染或既往感染。此外，对免疫功能低下和器官移植患者也有必要进行弓形虫感染的筛查。 12．参考文献 1) Pustowoit B, Liebert UG. Predictive Value of Serological Tests in Rubella Virus Infection during Pregnancy. Intervirology 1998;41:170-177.
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 2) 3) 4) 5) E 170/e 601/e 411 Toxo IgM (Toxo IgM) 文件编号：LAB－OP－MY020 5 页，共 第 5 页 版本：A/0 生效日期：2008-02-01 Cooper LZ, Alford CA. Rubella, in Infectious Diseases of the Fetus & Newborn Infant,: 5th Ed 2001, pp 347-88, ed Remington JS & Klein JO, Philadelphia: W.B. Saunders. Banatvala JE, Brown DWG. Rubella. Lancet 2004;363:1127-1137. Best JM, Banatvala JE. Rubella Principles and Practice of Clinical Virology, 4th edition, ed by Zuckerman AJ, Banatvala JE and Pattison JR 2000:387-418, John Wiley & Sons, Ltd. Pustowoit B, Grangéot-Kéros L, Hobman TC, Hofmann J. Evaluation of recombinant rubella-like particles in a commercial immunoassay for the detection of anti-rubella IgM. Clin Diagn Virol 1996;5:13-20. 6) Enders G, Knotek F, Pacher U. Comparison of various serological methods and diagnostic kits for the detection of acute, recent and previous Rubella infection, vaccination and congenital infections. J Med Virol 1985;16:219-232. 7) Detection and Quantification of Rubella IgG Antibody: Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test Products, Specimen Handling, and Use of Test Products in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. NCCLS Publication; 1997;Vol17,No17. 8) 9) Occupational Safety and Health Standards: bloodborne pathogens.(29 CFR Part 1910.1030). Fed. Register. Council Directive (2000/54/EC). Official Journal of the European Communities No. L262 from Oct. 17, 2000. 编写： 审核： 批准： 批准日期： 年 月 日
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