多重荧光 RT-PCR同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒方法
的建立
纪蕾;韩建康;吴晓芳;徐德顺;邱妤怡;陈莉萍;沈月华;查赟峰
【期刊名称】《中国人兽共患病学报》 【年(卷),期】2011(027)004
【摘要】目的 建立可同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的双重荧光RT-PCR快速检测方法,并应用于临床标本的检测.方法 使用针对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒各亚型代表株保守序列设计的特异性引物和TaqMan探针,通过调整引物、探针浓度优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系.对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行评估,并对临床粪便标本进行检测,与已有的单重荧光RT-PCR方法进行比较.结果 实验结果表明,该检测方法特异性强,对GⅠ型、GⅡ型诺如病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、甲型肝炎病毒进行检测,均无交叉反应;对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒核酸的最低检出限分别可达1pg/mL和10pg/mL,并且重复性好;对101份临床标本分别用已有的单重荧光RT-PCR和本文建立的多重荧光RT-PCR进行检测,结果显示本文建立的多重荧光RT-PCR方法对GI型诺如病毒的检测能力优于前者.结论 本研究建立的多重荧光RT-PCR方法能同时对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速检测.%The purpose of this study was to develop a multiplex real-time RT-PCR assay for rapid and simultaneous detection of norovirus genogroup Ⅰ and genogroup Ⅱ, and apply it to the detection of norovirus in clinical specimens.Specific primers and TaqMan probes were designed according to the conserved
多重荧光 RT-PCR同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒方法的建立
