槐耳颗粒对结直肠癌细胞凋亡及免疫功能的影响
一、项目概述：
结直肠癌患者大多是中晚期，900%的患者根治性手术后仍需要辅助化、放疗，然而尽管这些患者采取了手术和放、化疗等治疗措施，5年生存率大约在60%左右，治疗效果不理想的原因除了肿瘤本身因素外，手术和放化疗导致的机体免疫功能下降可能是恶性肿瘤复发或转移的重要因素：金克槐耳颗粒含有多糖蛋白(PS-T), PS-T具有抗癌活性[l]，且含有多种有机成分，十余种矿物质，槐耳菌质具免疫增强调节作用[2]。基础临床研究表明金克槐耳颗粒对多种恶性肿瘤包括，对肝癌、肺癌、食管癌、胃癌等均有独特疗效[1]，具有独特的直接抗癌作用和显著的免疫增强调节作用。本研究的目的：选择结直肠癌患者，术前应用槐耳颗粒，通过术后肿瘤组织的病理组织学变化探讨槐耳颗粒的抗肿瘤作用，术后槐耳颗粒联合辅助化疗治疗结直肠癌，通过免疫功能的评价探讨槐耳颗粒的免疫调节功能，同时通过长期的随访评判槐耳颗粒对结直肠癌患者远期生存的影响。 二、国内外研究现状和发展趋势
随着新的化疗药物和分子靶向药物的问世，近20余年来，结直肠痛的治疗水平取得了很大的提高，Moertel报道 [3]5-FU/LV方案用于Ⅲ期大肠癌病人的术后辅助治疗可以降低33%的死亡率。然而Ⅱ期的结肠癌患者仅能从术后辅助化疗中获得2%-4%的生存收益[4-7]。目前Ⅱ期结肠癌的术后辅助化疗仍处于争论之中。尽管化疗能够改善Ⅲ期结直肠癌患者的生存，但是有报道在接受术后化疗的Ⅲ期结直肠癌患者中，至少70%的患者接受了化疗却没有从目前的化疗方案中获益[8]，随着现代肿瘤免疫理论的发展，人们致力于研究开发具有抗肿瘤作用，同时又能调节机体免疫力、增强机体自身抗肿瘤功能的中药。抗癌新药金克槐耳颗粒，由南京中医药大学会同全军肿瘤研究中心等全国多家科研机构研制而成，经国家卫生部批准为国家级一类中药抗癌新药，为启东盖天力药业有限公司独家生产。金克槐耳颗粒主要成分：槐耳菌质。槐耳是我国民间药用真菌，其味苦辛、性平无毒，它具有以下功效：益气扶正，扶固五脏六腑之真气，促进虚弱脏腑功能逐渐复原，槐耳还可破血消瘤，标本兼治，补气行血，从而扶正固本，因此槐耳既能扶正固本，又可驱邪抗癌[9]。由于金克槐耳颗粒含有多糖蛋白(PS-T),PS-T具有抗癌活性[1]，且含有多种有机成分，十余种矿物质，槐耳菌质具有免疫增
强调节作用[2]。基础临床研究表明金克槐耳颗粒对多种恶性肿瘤包括，对肝癌、肺癌、食管癌、胃癌等均有独特疗效[1]。具有独特的直接抗癌作用和显著的免疫增强调节作用，其免疫调节作用机制包括激活巨噬细胞或中性粒细胞活性；激活自然杀伤细胞活性；促使T淋巴细胞分裂、增殖、成熟及分化，且调整T细胞的比例；提高体液免疫；诱导和产生α及γ干扰素；通过产生某些细胞激活细胞因子如白介素IL-2(IL-2)及NK细胞激活因子等，进一步激活有关的免疫细胞起作用。本研究的目的：选择结直肠癌患者，术前应用槐耳颗粒，通过术后肿瘤组织的病理组织学变化探讨槐耳颗粒的抗肿瘤作用，术后槐耳颗粒联合辅助化疗治疗结直肠癌，通过免疫功能的评价探讨槐耳颗粒的免疫调节功能，同时通过长期的随访评判槐耳颗粒对结直肠癌患者远期生存的影响。
三、立项的背景和意义
大肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，无论是发病率或死亡率都位居前列。几十年来，5- FU/LV方案一直是大肠癌治疗的标准方案，但其有效率仅为25%左右，晚期大肠癌病人的生存期仅有12个月左右；尽管随着草酸铂、开普拓以及靶向药物贝伐单抗( bevacizumab)、西妥昔单抗（cetuximab）等新药的出现和FOLFOX、IFL、IRROX等新的化疗方案的实施，但是仍有40-50%的大肠癌患者死于复发或转移。由于大多数化疗药物对机体免疫系统存在一定的影响，甚至有些化疗药物本身就是免疫抑制剂，因此，如何改善患者免疫功能，已成为目前临床十分关注的问题。槐耳是一种药用真菌，主要活性成分是多糖蛋白(Ps-T)。大量的临床研究提示槐耳颗粒在防治肿瘤复发、转移的积极疗效，且能有效提高患者的生存质量。槐耳颗粒冲剂能保护恶性肿瘤患者的免疫功能免受化疗的冲击，改善病人的远期生存。进一步的实验研究，提示槐耳颗粒可能通过增强机体免疫功能、促进肿瘤细胞的在G1期和S期凋亡、对化疗药物的增敏和逆转其耐药作用、抗肿瘤血管生成作用来防治肿瘤的复发和转移。目前有关槐耳颗粒联合化疗治疗结直肠癌的研究报道较少，本研究拟选择结直肠癌患者，术前应用槐耳颗粒，通过术后肿瘤组织的病理组织学变化探讨槐耳颗粒的抗肿瘤作用，术后槐耳颗粒联合辅助化疗治疗结直肠癌，通过免疫功能的评价探讨槐耳颗粒的免疫调节功能，同时通过长期的随访评判槐耳颗粒对结直肠癌患者远期生存的影响。
参考文献
1． 庄毅，真菌抗癌药物槐耳颗粒的研制[J].中国肿瘤，1999，8 (12): 540-543.
2． 陈慎宝，丁如宁.槐耳菌质成分对小鼠免疫功能的影响[J].食用菌学报，1995，2 (1)：21.
3． Schrag D. Rifas-Shiman S. Salti L et al. Adjuvant chemotherapy use for medicare beneficiaries with stage ll colon cancer. J Clin Oncol 2002: 20: 3999-3905
4． IMPACT-B2 Investigators. Efficacy of adjuvant fluorouracil and folinic acid in B2 colon cancer. International Multicenter Pooled Analysis of B2 Colon Cancer Trials. J Clin Oncol 1999: 17:1356-1363
5． Mamounas E, Wieands S, Wolmark N et al. Comparative efficacy of adjuvant chemotherapy in patients with Dukes’ B vcrsus Dukes’ C colon cancerr: Results from four NSABP adjuvant studies (c-01. C-02. C-03 and C-04). J CIin Oncol 1999: 17: 3553-3559
6． Moertel CG Fleming TR, Macdonald JS et al. intergroup study of fluorouracil +levamisole as adjuvant therapy for stage ll/Dukes B2 colon cancer. J Clin Oncol 1995: 1 3 : 2936-2943
7． Schrag D,Gelfand S. Bach P et al. Adjuvant chemotherapy for stage II colon cancer: insight from a SEER-Medicare cohort. Proc Am Soc Clin Oncol 200 1 : 20: 123a.
8． K. H. Link T. A. Sagban M. M- rschel Colon cancer: survival after curative surgery Langenbecks Arch Surg (20U5) 390:83-93
9． 施虹申，茅冬悔．金克槐耳冲剂药理初析.上海中医药杂志， 1995，1：9.
四、研究目标和内容
研究目标 本研究拟选择结直肠癌患者，术前应用槐耳颗粒，通过术后肿瘤组织的病理组织学变化探讨槐耳颗粒的抗肿瘤作用，术后槐耳颗粒联合辅助化疗治疗结直肠癌，通过免疫功能的评价探讨槐耳颗粒的免疫调节功能，同时通过长期的随访评判槐耳颗粒对结直肠癌患者远期生存的影响；
研究内容 选择我院经病理确诊的工的Ⅰ-Ⅲ工期结直肠癌患者6 0例。 1．病例入选标准：(1)所有病例均经病理确诊，(2)手术前未接受放、化疗， (3)术前BUS、CT、MRI进行TNM分期，(4)所有病例均在本院接受标准的根治性手术（无肉眼及显微镜下肿瘤残留，切缘阴性，淋巴结清扫范围大于转移范围），(5)获得病人的知情同意，(6)散发性结直肠癌，卡氏评分6 0分以上者。
2．病例排除标准：(l)术前病理、影像学检查及术中探查发现有远处转移的Ⅳ期患者，（2）术中肿瘤残留无法施行根治手术者，(4)排除家族性息肉病性结肠癌(FAP)、遗传性非息肉病性结肠癌(HNPCC)和克隆氏病、溃疡性结肠炎恶变，(5)合并有心脑肝肺肾等重要脏器疾病，及其严重代谢性疾病者。 五 研究方法
符合上述入选标准的结直肠癌患者60例，随机分为两组：
槐耳颗粒联合治疗组：用法用量：口服。一次20g，一日3次。术前应用7-10天，术后第6天继续口服3 0天为一个疗程，每年连续服药6-8个疗程，连服用3年。术后3周开始辅助化疗FOLFOX4方案：化疗每3周重复，共化疗六个周期。 对照组：仅行手术加术后FOLFOX4方案化疗。 检测指标：
1检测患者槐耳颗粒治疗前、术后一周血CEA水平
2免疫组化方法检测患者手术切除的肿瘤组织中CD68、CD4、CD8阳性淋巴细胞的数量，评价患者肿瘤组织中机体抗肿瘤免疫反应状况，肿瘤组织凋亡指数的检测，评价抗凋亡作用
3生活质量评定：治疗前及疗程结束后Karnofsky评分，治疗前较疗程结束后高1 0分者为提高，减少大于10分者为降低，增加或减少小于10分者为稳定。 4治疗前后血常规、血小板、肝肾功能、T细胞亚群CD3 CD4. CD8.
CD4/CD8比值的变化，不良反应按WHO抗癌药物不良反应分级标准[4]评价。生活质量状况按Karnofsky评分标准，在治疗前后均评分。[4]周绪堂．实用肿瘤诊疗手册[M]． 南昌：江西科学技术出版社，1979.1018. 5采用信件或电话随访，记录患者的无病生存时间和总生存时间
统计学方法 生存率计算方法用寿命表法，数据处理采用SPSS10.0统计软件包行χ2检验，统计水准α =0. 05。 预期结果
1术前应用槐耳颗粒，通过术后肿瘤组织凋亡指数的检测探讨槐耳颗粒的抗肿瘤作用；
2术后槐耳颗粒联合辅助化疗治疗结直肠癌，通过免疫功能的评价探讨槐耳颗粒的免疫调节功能
3通过长期的随访评判槐耳颗粒对结直肠癌患者远期生存的影响。 组织方式及具体负责项目
钱 军教授：蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科，硕士生导师，课题总负责人，
主要进行课题设计、组织、协调并监督实施：
李德群教授：蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科，硕士生导师，课题负责人之一 陈邦领博士：蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科，负责项目的实施和资料收集、
整理。
杨明副主任医师：蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科，负责项目的实施和资料收
集、整理。
喻大军主治医师：蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科，硕士。负责项目的实施和
资料收集、整理。
癌症肿瘤学：槐耳颗粒对结直肠癌细胞凋亡及免疫功能的影响
