欧阳育创编 2021.02.04 欧阳育创编 2021.02.04
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基
蓝的分离和测定方法
时间：2021.02.04 创作：欧阳育 柱色谱是色谱分析方法中的一种 ,由于柱色谱能够较大量地有效分离和提纯有机化合物 ,所以广泛应用在化学分析 ,药物研究 ,天然物质提取 ,医学研究等领域。在大学有机实验教学中 ,往往都设有柱色谱实验课。在实验教材中 ,一般采用中性氧化铝为固定相分离甲基橙和亚甲基蓝的混合物
[1～3 ],
但此方法分离的色谱
带有扩散现象 ,影响分离效果;且实验中只有定性观察 ,不进行定量操作。在本实验中 ,我们改用硅胶为固定相 ,选用了新的样品溶剂和洗脱剂 ,在很大程度上抑制了色带扩散 ,而且色谱带分明 ,大大提高了分离效果。在实验中还增加了定量测定的内容 ,通过计算回收率 ,可对同学们的实验情况进行评判 ,使你们能够认真收集分离物质 ,不断地提出问题 ,调动了你们做实验的积极性。 1 实验材料和方法
1. 1 材料 分光光度计(岛津 UV22201) ,玻璃色谱柱。柱色谱用硅胶(100～140 目) ,甲基橙(指示剂) ,亚甲基蓝(指示剂) ,H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) ,0. 2mol· L HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液) 。
1. 2 甲基橙标准曲线的绘制
用A 液做溶剂 ,配制甲基橙系列标准溶液 ,在λmax = 450nm处
欧阳育创编 2021.02.04 欧阳育创编 2021.02.04
- 1
欧阳育创编 2021.02.04 欧阳育创编 2021.02.04
测得甲基橙吸光度(表 1) 。 1. 3 亚甲基蓝标准曲线的绘制
用B 液做溶剂 ,配制亚甲基蓝系列标准溶液 ,在λmax = 661nm 处测得亚甲基蓝吸光度(表1) 。 1. 4 甲基橙和亚甲基蓝的分离
在玻璃色谱柱( d = 1cm , l = 10cm)底部用脱脂棉轻轻塞紧 ,称取 4g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻璃棒调好。在柱中先加入 1/ 2 柱高的蒸馏水 ,打开活塞 ,在搅动下把糊状硅胶加入柱中 ,同时调整活塞使流速为 1 滴/ s。当柱中液面将要露出硅胶面时 ,加入 5mL左右的A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用移液管准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g· L ) 。待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、 蓝两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 ,当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。此后改用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。
表 1 甲基橙标准曲线数据和亚甲基蓝标准曲线数据
甲基橙亚甲基蓝
ρ / mg· LA ρ / mg· L A
0. 000 0. 000 0. 000 0. 000
欧阳育创编 2021.02.04 欧阳育创编 2021.02.04
– 1
– 1
-1
欧阳育创编 2021.02.04 欧阳育创编 2021.02.04
1. 9700. 1651. 110 0. 292 3. 939 0. 326 1. 666 0. 420 5. 909 0. 477 2. 221 0. 547 7. 878 0. 635 2. 776 0. 678 9. 848 0. 784 3. 331 0. 799
甲基橙的吸光度&浓度方程为 A = kρ。其中 k = 0. 0804mg
1
-
· L。
-
亚甲基蓝的吸光度&浓度方程为 A = kρ,其中 k = 0. 2445mg
1
· L。
2 数据处理
把收集到的甲基橙溶液用 A 液定容到 25mL 的容量瓶中 ,并在 450nm 处测定吸光度 A值,甲基橙的回收率可从下公式计算得到:回收率% = ( A ×25 ×10 ) / ( km) 。其中 k = 0.0804mg · L , m 为甲基橙在混合物上样中的实际量(mg) 。 把收集到的亚甲基蓝溶液用B 液定容到 100mL 的容量瓶中 ,并在 661nm 处测定吸光度A 值,亚甲基蓝的回收率可从下公式计算得到:回收率% = ( A ×100 ×10) / ( km) 。其中 k = 0. 2445mg · L , m 为亚甲基蓝在混合物上样中的实际量(mg) 。
平行 5 次实验的数据结果见表 2。 表 2 甲基橙和亚甲基蓝回收率
实验号 甲基橙A 回收率亚甲基蓝A 回收率 1 0. 629 97. 8 % 0. 47697. 3 %
欧阳育创编 2021.02.04 欧阳育创编 2021.02.04
- 3
- 1
- 3
- 1
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法之欧阳育创编
