RT-PCR法克隆柑橘皮果胶酯酶基因

RT－PCR法克隆柑橘皮果胶酯酶基因

叶 华1，2，马 力2

【摘 要】摘要:试验利用RT-PCR技术将新鲜柑橘皮果胶酯酶基因克隆到pGEM T-Easy载体上，并进行了鉴定和序列测定。结果表明:该基因为克隆成功的果胶酯酶基因，全长1797bp，开放阅读框架长1785bp，共编码594个氨基酸。该序列含有PMEI和Pectinseterase两个保守序列。该序列与Covadonga R发表的citrus CsPME4 3'端序列氨基酸同源性100%。 【期刊名称】包装与食品机械 【年(卷),期】2011(029)003 【总页数】3

【关键词】关键词:RT－PCR;柑橘皮;果胶酯酶

果胶酯酶来源广泛，存在于所有植物组织中，并且存在于至今所发现的所有种属中［1］。高等植物组织如番茄、柑桔、苹果、香蕉、番木瓜等都含有果胶酯酶，植物病原菌如甘蓝黑腐黄杆菌和能引起软腐病的欧氏杆菌等也能产生果胶酯酶。果胶酯酶有很多同工酶，是一个多基因家族酶。目前，果胶酯酶在工业中主要用于制备低酯果胶、提高果汁出汁率、提高果粒硬度、改善粘度等［2］，所以开发和寻求更好的果胶酯酶必将带来更大的收获。对果胶脂酶结构和基因方面的研究目前已引起国内外学者广泛关注。O.Markovie等人第一个确定了番茄PE的蛋白质序列并对番茄中的PME同工异构体进行了研究［3－4］。Cristina Castillejo等通过联合运用基于PCR文库筛选技术(PCR－based library screening)和RT－PCR方法从不同生长阶段的草莓中分离出了4种不同的草莓果胶酯酶基因 FaPE1、FaPE2、FaPE3、和FaPE4［5］。在国内，对