第2讲 微生物的培养与应用
考纲要求 1.微生物的分离和培养 2.某种微生物数量的测定 3.培养基对微生物的选择作用 全国卷五年考情 2017·卷ⅠT37,2016·卷ⅠT39,2016·卷ⅢT39,2015·卷ⅠT39,2014·卷ⅠT39,2014·卷ⅡT39,2013·卷ⅡT39 2016·卷ⅠT39,2014·卷ⅡT39 2017·卷ⅠT37,2016·卷ⅢT39,2014·卷ⅠT39,2013·卷ⅡT39 考点一| 微生物的实验室培养 (对应学生用书第236页) [识记—基础梳理]
1、培养基
(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质.
(2)营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐.此外还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求.
(3)①种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基.
②下表为某微生物培养基的成分
KH2PO4 Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 葡萄糖 10.0 g 尿素 1.0 g 琼脂 15.0 g H2O 1 000 mL 1.4 g
0.2 g 该培养基中可以为微生物提供碳源的是葡萄糖,因为此培养基中加入了琼脂,故该培养基为固体培养基.
2、无菌技术
(1)关键：防止外来杂菌的入侵. (2)不同对象的无菌操作方法(连线)：
[答案] ①—b—Ⅰ ②—b—Ⅱ ③、④—a ⑤—a—Ⅲ、Ⅳ ⑥—b
3、大肠杆菌的纯化培养
(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板 (2)纯化大肠杆菌的方法
①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落,即可获得较纯的菌种. ②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种.
③接种方法：下图甲可表示用平板划线法接种获得的平板；下图乙可表示用稀释涂布平板法接种获得的平板.
④纯化原理：上图甲菌体的分散是通过一系列的连续划线操作实现的；上图乙菌体的分散是通过一系列的梯度稀释和涂布平板操作实现的. 4、菌种的保藏方法
(1)临时保藏法：对于频繁使用的菌种,先接种到试管的固定斜面培养基上培养,然后放入4 ℃的冰箱中保藏.
(2)甘油管藏法：对于需要长期保存的菌种,先将菌液转入灭菌后的甘油中,混匀后放在－20 ℃冷冻箱中保存.
[教材边角知识] 选修1 P18“旁栏小资料”,微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法吗？微生物接种的核心是什么？
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【提示】 不是,微生物的接种技术还包括斜面接种、穿刺接种等方法,其核心是防止杂菌的污染,保证培养物的纯度.
[运用—考向对练]
考向1 考查无菌技术
1、牛奶中富含蛋白质,长期饮用有助于增强体质,但牛奶同时也是多种疾病的传播载体.国家标准是每毫升牛奶中细菌数小于30 000个.以下是牛奶消毒及细菌检测实验.分析回答：
(1)图中步骤①称为________消毒法.步骤②是________.
(2)培养基中的蛋白胨可以为微生物提供________.进行步骤③操
作时,应选用下列中的哪种工具？________.为了避免杂菌污染,此步骤应在________附近进行.
(3)将接种后的培养基和作为对照的________________同时放入37 ℃恒温培养箱中,培养36小时.取出后统计各平板的菌落数,结果如下表所示.应该选择其中稀释倍数为____________的平板进行计数,经过消毒后的牛奶中,细菌数大约是____________/mL.
牛奶稀释倍数 平板1菌落数 平板2菌落数 平板3菌落数
102 87 83 85 103 10 12 10 104 1 1 0 [解析] (1)80 °C恒温水浴15 min是巴氏消毒法,步骤②是进行系列稀释(或梯度稀释).
(2)培养基中的蛋白胨可以为微生物提供碳源、氮源(和维生素),③是接种,因为需要计数,需用稀释涂布平板法,接种工具是涂布器；为了避免杂菌污染,此步骤应在酒精灯火焰附近进行.
(3)统计各平板的菌落数时,应选择菌落数在30～300的计数,经过消毒后的牛奶中,细菌数大约是(87＋83＋85)÷3×102＝8 500个.
[答案] (1)巴氏 系列稀释(或梯度稀释) (2)碳源、氮源(和维生素) B 酒精灯火焰 (3)一个未接种的培养基 102 8 500个
[技法总结] 选择无菌技术的原则
1、考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好.
2、考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒,而不能灭菌. [备选习题]
(2018·湖北省七市高三一调)我国规定1升自来水中大肠杆菌不得超过3个.在培养基中加入伊红美蓝,可以使大肠杆菌的菌落呈深紫色,并带有金属光泽.有关部门据此对自来水中的大肠杆菌进行检测.具体步骤大致如下：
(一)用火焰灼烧自来水龙头3分钟,然后打开水龙头放水5分钟,再用无菌的三角瓶接取1 000毫升水样,盖好瓶塞.
(二)将漏斗和抽滤瓶固定好,用镊子夹住滤膜边缘,将水样倒入漏斗中,边抽滤、边加水.
(三)用镊子将滤膜取出、放在无菌平板上进行培养,观察并记录实验结果.
回答下列问题：
(1)实验中所用的醋酸纤维素滤膜、漏斗、抽滤瓶、镊子等实验器材和培养基都需先用______________法进行灭菌.如需检测培养基灭
菌
是
否
彻
底
,
常
用
的
方
法
是
_________________________________________________________ ________________________________________________________________.
(2)制作本实验所用的无菌平板时,需要加入________、水、无机盐等大肠杆菌所必需的营养成分,以及加入________,便于统计菌落外；还需要将培养基的pH调整至________性.鉴别是否有大肠杆菌菌落,需要在培养基中加入________.
(3)按上述步骤制作的3个样品平板上所有的菌落数分别为49、51、
2019版高考生物一轮复习 选修1 第2讲 微生物的培养与应用
