HPLC-ELSD法检测烟草秸秆中水溶性糖
吴福芳1，陈 悦1，芦广银1，马扩彦2，戴 亚2，盛良全1*
【摘 要】建立一种采用45%乙腈水溶液作提取溶剂于40℃下超声萃取35 min，乙腈水溶液等度洗脱，ZORBAX Carbohydrate糖柱-HPLC-ELSD法测定烟草秸秆中水溶性糖含量的方法。水溶性糖的线性范围：鼠李糖、果糖、葡萄糖、蔗糖的实验线性范围为8.0～1 000.0 mg/L，木糖、甘露糖的实验线性范围为16.0～1 000.0 mg/L，麦芽糖的实验线性范围为10.0～1 000.0 mg/L，且在此范围内相关系数均较好。相对标准偏差（RSD）（n=6）均小于3.73。结果表明此法准确简单、易操作、灵敏度高，适用于批量烟草秸秆以及烟草制品中水溶性糖含量的定量分析与测定。
【期刊名称】阜阳师范学院学报（自然科学版） 【年(卷),期】2016(033)004 【总页数】7
【关键词】糖分析柱；高效液相色谱法；烟草秸秆；水溶性糖
我国是烟草生产大国，每年产量约占全球的42%，烟草秸秆产量约为450万吨[1]。以往对烟草秸秆处理方式主要是焚烧和丢弃，有效利用率低。烟草秸秆作为一种重要的可再生生物质资源，它的合理开发利用有利于两烟产业可持续发展。对烟草秸秆组成成份分析等基础数据，是其科学、合理、有效、可持续发展的基础[2]。目前对烟草秸秆的成份报道不是很多，其中水溶性糖的研究较少[3]。而水溶性糖是烟草秸秆的重要组成成份，对烟草秸秆水溶性糖的合理分析关系到烟草秸秆的‘五化’利用[4]。因此，选择合适的方法及最佳测量条件，有利于烟草秸秆进一步应用研究。目前国内外农作物秸秆中的水溶性糖研究不
是很多[5-9]，其对于烟草秸秆中水溶性糖的检测主要是按照烟草行业标准（YC/T 159—2002）进行测定，没有对烟草秸秆水溶性糖进行系统分析、检测。
高效液相色谱法是近些年来检测水溶性糖最多的方法之一，主要采用的是示差折光检测器[10-11]和蒸发光散射检测器[12-15]。相对于示差折光检测器，蒸发光散射检测器的灵敏度要高，适用范围较广。且比传统的化学方法精确度高（能检测单一糖的成分），耗时短，成本低。本文采用安捷伦糖分析柱为固定相、乙腈-水作流动相、蒸发光散射检测器，实现了烟草秸秆中7种水溶性单糖和二糖的同时测定。为生物质秸秆中水溶性糖的快速分析奠定了一定的基础。
1 材料与方法
1.1 材料和仪器
实验所用烟草秸秆来自阜阳当地收割。YL9100高效液相色谱系统、YL9181蒸发光散射检测器(ELSD)（托摩根生物科技有限公司）；微量进样器（0.1mL）；分析天平（0.000 1 g）（上海越平科学仪器有限公司）；0.22μm水系微孔滤膜、0.22μm有机系微孔滤膜，SPE-C18固相萃取小柱（BOJIN），全自动固相萃取仪（SPE-8上海本昂科学仪器有限公司）；DZX-1型（6050B）真空干燥箱（上海福玛实验设备有限公司）、YB-500A型高速多功能粉碎机（永康市速锋工贸有限公司）、SHB-ⅢS循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；UP型超声纯水机（优普仪器有限公司）。 1.2 方法 1.2.1 样品处理
准确称取已烘至恒重的烟草秸秆粉末0.5 g，精确至0.000 1 g，置于25mL容
量瓶中，加入10mL 45%（体积分数）乙腈水溶液，于40℃下超声波辅助提取35 min，抽滤，滤液用45%乙腈水溶液定容至25mL。样液用预活化好的SPE-C18固相萃取小柱[16-18]（活化方法：先用15mL甲醇活化，再用30mL超纯水平衡）处理后，再经0.22μm有机过滤膜过滤，置于离心管中，待进样分析。 1.2.2 色谱条件
色谱柱：安捷伦ZORBAX Carbohydrate（4.6mm×250mm，5μm）（南昌捷岛科学仪器有限公司）；流动相：乙腈/水（V/V）=75∶25，流速为1.0mL/min，恒温器温度：25℃；ELSD Spray Chamber温度：30℃，Drift Tube温度：60℃；载气：高纯氮（≥99.999%），压力：0.5 MPa；进样量：20μL。
1.2.3 标准溶液配制
准确称取已经烘干的鼠李糖、木糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖各0.1 g，甘露糖0.2 g，精确至0.000 1 g，均置于100mL小烧杯中，加适量45%乙腈水溶液，搅拌加速溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，得糖标准储备液，置于4℃冰箱中保存。实验中所用工作液浓度为储备液的0.5倍。准确移取5mL糖标准储备液于10mL容量瓶中，用45%乙腈水溶液定容至刻度，摇匀即得到标准工作液。
2. 结果与讨论
2.1 色谱条件 2.1.1 流动相的选择
用乙腈和水作为高效液相色谱分析的流动相，在固定流速为1.0mL/min，恒温
HPLC-ELSD法检测烟草秸秆中水溶性糖
