目 录
1 前言 ................................................................................................................................... 1 1.1 龙船花的概述 ............................................................................................................. 1 1.2 龙船花的繁殖方式和组培意义 ................................................................................. 2 2 仪器、材料与试剂 ........................................................................................................... 2 2.1 实验材料 ..................................................................................................................... 3 2.2 主要实验仪器 ............................................................................................................. 3 2.3 实验试剂 ..................................................................................................................... 3 3 实验方法 ........................................................................................................................... 3 3.1 龙船花外植体灭菌的时间 ......................................................................................... 3 3.2 龙船花的初代诱芽培养 ............................................................................................. 3 3.3 龙船花继代培养 ......................................................................................................... 3 4 结果与分析 ....................................................................................................................... 4 4.1 不同的外植体灭菌时间对培养基及外植体影响..................................................... 4 4.2 不同激素及浓度对龙船花带茎节茎段诱芽萌动的影响......................................... 5
4.2.1 不同6-BA浓度对龙船花外植体诱芽萌动影响 ........................................... 5 4.2.2 不同浓度6-BA和NAA组合对龙船花外植体诱芽的影响 ......................... 6 4.3 不同激素及浓度对龙船花带茎节茎段继代培养的影响......................................... 7 5 讨论 ................................................................................................................................... 7
矮粉龙船花快速繁殖技术研究
作者 姚瑞贤 指导老师 宛淑艳
（湛江师范学院生命科学与技术学院， 湛江 524048）
摘 要：以矮粉龙船花（Ixora williamsii 'Sunkist'）带茎节茎段为外植体，探讨不同灭菌时间及不同培养基对龙船花茎段腋芽萌动，继代增殖的影响。结果表明：外植体在使用升汞及吐温-80灭菌时，最佳灭菌时间为9.5min。在培养基为MS+6-BA5.5mg·L+NAA3.0mg·L时，矮粉龙船花茎段腋芽萌动效果最好；在培养基为MS+6-BA2.0mg·L-1 +NAA0.75mg·L-1时，矮粉龙船花茎段腋芽继代增殖效果较好。
关键词：矮粉龙船花（Ixora williamsii 'Sunkist'）；茎段；腋芽
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The study on the biotechnology of rapid multiplication towards
chinensis Ixora
YaoRuixian
Life Science and Technology School, Zhanjiang Normal University, Zhanjiang, 524048 China Abstract：Used the stem of Chinensis ixora（Ixora williamsii 'Sunkist'）with sprout as explant, to study the induction of different time range and different nutrient media towards germination of Ixora chinensis, and their effect on their multiplication. The experimental results show when the explant is used mercury bichloride and Tween-80 for sterization, the best time range is 9.5 minutes. When MS+6-BA5.5mg·L-1 +NAA3.0mg·L-1 is the nutrient medium, the inductive germination of the stem of Ixora chinensis with sprout reach the best effect. When MS+6-BA2.0mg·L +NAA0.75mg·Lis the nutrient medium, the multiplicative sprout of explant from Ixora chinensis get better effect.
Key words: Chinensis ixora（Ixora williamsii 'Sunkist'）; take the caulis knot caulis segment; the beginning generation develops; develop after the generation
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1 前言
1.1 龙船花的概述
龙船花（Ixora williamsii 'Sunkist'），茜草科，龙船花属。别名：百日红、五月花、映山红、牛兰、珠桐、番海棠、大将军、红樱花、仙丹花、英丹花、水绣球等，是缅甸国花。龙船花栽培品种众多，大致可分为大叶品种和小叶品种，或高品种和矮品种，主要有：大王龙船花、博尔博奈卡龙船花、洋红龙船花、黄龙船花、大黄龙船花、尖叶龙船花、宫粉龙船花、白龙船花、蝶叶龙船花、矮龙船花、矮黄龙船花、矮白龙船
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花、矮粉龙船花、矮旭龙船花、杏黄龙船花、香龙船花、霞玉龙船花。龙船花株形美观，开花密集，花色丰富，终年有花可赏，是重要的盆栽木本花卉，成为我国热带、亚热带地区的主要绿化木本花卉，在中国南方露地栽植，在北方多温室栽培[2]。适合庭院、宾馆、风景区布置，高低错落，花色鲜丽，可修建各种优美立体造型，产生优雅别致的景观效果。龙船花还可以可入药，有散瘀止血，治跌打损伤，疮疖痈肿，调经，降压的功效。《唐本草》有记载：主折伤血内涸，续绝，补骨髓，止痛，安胎。根、茎可治肺结核咯血，胃痛，风湿关节痛，跌打损伤；花可治月经不调，闭经，高血压。
本实验的矮粉龙船花是矮生龙船花品种之一。常绿小灌木或小乔木，高0.5m~2m。叶对生，几乎无柄，薄革质或纸质，花冠裂片及雄蕊均4枚。浆果近球形，熟时红黑色[1]。花冠红色或橙红色，花期夏季，较长，每年3-12月均可开花。
1.2 龙船花的繁殖方式和组培意义
龙船花喜温暖、湿润和阳光充足环境。不耐寒，耐半阴，不耐水湿和强光。龙船花对温度的适应性比较强。龙船花喜湿怕干。茎叶生长期需充足水分，保持盆土湿润，有利于枝梢萌发和叶片生长[3]。龙船花的传统繁殖方式主要是播种、其次是压条、扦插等。种子繁殖存在三大缺点：（1）种子存在退化现象；（2）容易产生品种混杂，不能保持原品种的优良品质；（3）繁殖速度慢，远不能满足市场需求。其次，传统的营养繁殖有：（1）容易积累病毒，繁殖时不易成活；（2）繁殖过程要求较高的技术、需要大量人工操作，繁殖效率很低；（3）繁殖出的新植株根系不发达，寿命较低三大缺陷。
为了避免品质的退化及在短期内大量生产以满足市场要求，采用组织培养方法进行龙船花的快速培养将是最终解决龙船花繁殖的主要方法。龙船花是木本植物，采用组培技术培养难度较大。目前国内只有曾宋军等对龙船花进行了组织培养的的研究报道，国外的研究也很少见，因此对龙船花的组培研究具有重要意义。
矮粉龙船花是最小型品种，较其他品种容易生出侧枝，故选其为实验材料。本实验以矮粉龙船花的带茎节茎段为外植体，通过不同种类或不同激素浓度的配比，探讨矮粉龙船花的带节茎段的腋芽萌发、继代芽增值的最适合培养基，为大量工业化生产提供参考。
2 仪器、材料与试剂
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2.1 实验材料
矮粉龙船花，取于湛江师范学院第一教学楼外花圃。
2.2 主要实验仪器
卧式高压灭菌锅、平行风超净工作台、电子天平。
2.3 实验试剂
MS培养基、酒精（75%）、升汞（0.1%）、吐温-80、6-苄基腺嘌呤（6-BA）、萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等。
3 实验方法
3.1 龙船花外植体灭菌的时间
将龙船花带茎节茎段为外植体，在操作台上用75%酒精浸泡30s，用无菌水漂洗3~4次，再浸泡在加入0.5ml吐温-80的0.1%升汞溶液中灭菌，设置9个灭菌时间梯度（8~12min）。灭菌过程中要轻摇，使升汞充分对外植体进行灭菌，灭菌后再用无菌水漂洗8~10次后，浸泡在无菌水中。将灭菌外植体接种到MS基本培养基上，一周后，观察培养基污染情况和外植体存活情况。
3.2 龙船花的带茎节茎段腋芽诱导培养
选取生长健壮，无病虫害的当年生茎（当年生茎颜色较翠绿，较多年生茎的柔嫩），小心剪去叶片。先用洗衣粉水快速冲洗，再用自来水冲洗30~60min。将冲洗好的茎段切成1~2cm左右的切段，每个切段带一个茎节或茎尖。在操作台上对外植体进行最佳时间灭菌。在无菌操作台上用解剖刀切除外植体已被灭菌液浸润的部分。将处理好的茎段分别接种在不同的配方培养基（以MS为基本培养基，附加不同浓度的6-BA和6-BA/NAA[10]）上，共有12个配方，每种配方诱芽培养基接种15瓶，每瓶均1棵。培养温度：25±2℃，光照时间：10~14h，光照强度：1500~2000lx[8]。培养时间30~40天，每隔一周进行观察并记录外植体生长情况。
3.3 龙船花茎段腋芽继代培养
选取龙船花初代培养中，生长健壮、发育良好的试管苗。在超净工作台内将试管苗取下，裁剪成约1cm长、每段至少含一个腋芽的小茎段，将小段上叶片去除。将处理好的龙船花带芽小茎段接种于继代培养基（MS培养基附加不同浓度的6-BA和
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NAA）上。每瓶接种1个小茎段，有5个配方，每个配方接种5瓶、共接种25个小茎段。 将接种好的继代培养基放于25℃左右、光照强度为1500~2000lx、光照时间10h/d条件下培养[9]，每隔一周进行观察，记录茎段的生长情况。
4 结果与分析
4.1 不同的外植体灭菌时间对培养基及外植体影响
表1 不同灭菌时间对培养基和外植体影响
灭菌时间(min) 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5 11.0 11.5 12.0
接种数 （个） 15 15 15 15 15 15 15 15 15
污染数 （个） 14 10 7 1 1 0 0 0 0
污染率 （%） 93.3 66.7 46.6 6.6 6.6 0 0 0 0
存活数 （个） 15 15 14 13 7 5 2 0 0
存活率 （%） 100 100 93 86.7 46.5 33.3 13.3 0 0
由表1可知，培养基的污染率和外植体的存活率按灭菌时间的延长而减少。前三组（灭菌时间8~9.0min）培养基外植体接种后污染严重，最高达93.3%，最低也接近50%，所以前三组灭菌时间太短，不合适用于本实验；最后四组（灭菌时间10.5~12.0min）培养基污染率为零，但外植体经过长时间灭菌后，存活率很低，甚至存活率为0%，所以这四组灭菌时间也不合适；第4、5组（灭菌时间9.5~10.0min）培养基污染率在6.6%，较低，外植体的存活率高，比较这两组发现，灭菌时间为9.5min的外植体存活率远大于灭菌时间为10.0min的外植体存活率，达到93.0%，说明该灭菌时间可以作为本实验中龙船花外植体灭菌时间。经过筛选，本实验龙船花外植体灭菌最适时间为9.5min。
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矮粉龙船花快速繁殖技术研究
