第五章常用分子生物学技术的原理及其应用
一、选择题
（一） A型题
1 ?分子杂交实验不能用于
习题（引自网络精品课程）
A .单链DNA与RNA分子之间的杂交B .双链DNA与RNA分子之间的杂交 C .单链RNA分子之间的杂交D .单链DNA分子之间的杂交 E .抗原与抗体分子之间的杂交 2 .关于探针叙述错误的是
A .带有特殊标记B ?具有特定序列C ?必须是双链的核酸片段 D ?可以是基因组DNA 片段E .可以是抗体
3 .下列哪种物质不能用作探针
A . DNA片段B . cDNA C .蛋白质D .氨基酸E . RNA片段 4 .印迹技术可以分为
A . DNA印迹B . RNA印迹C .蛋白质印迹D .斑点印迹E .以上都对 5 . PCR实验延伸温度一般是
A . 90 C B . 72 C C . 80 C D . 6 . Western blot 中的探针是
95 C E .
60 C
A . RNA B .单链 DNA C . cDNA D .抗体 E .双链 DNA
7 . Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是
A .基本原理不同B .无需进行限制性内切酶消化 C .探针必须是RNA D .探针必须是DNA E .靠毛细作用进行转移
8 .可以不经电泳分离而直接点样在 NC膜上进行杂交分析的是 A .斑点印迹B .原位杂交C . RNA印迹D . DNA芯片技术 E . DNA印迹
9 .下列哪种物质在PCR反应中不能作为模板
A . RNA B .单链 DNA C . cDNA D .蛋白质 E .双链 DNA 10 . RT-PCR中不涉及的是
A .探针 B . cDNA C .逆转录酶 D . RNA E . dNTP 11 .关于PCR的基本成分叙述错误的是 A .特异性引物B .耐热性DNA聚合酶C . dNTP D .含有Zn 2+的缓冲液E .模板 12 . DNA链末端合成终止法不需要
A . ddNTP B . dNTP C .引物标记D . DNA聚合酶E .模板 13 . cDNA文库构建不需要
A .提取mRNA B .限制性内切酶裂解 mRNA C .逆转录合成cDNA D .将cDNA克隆入质粒或噬菌体E .重组载体转化宿主细胞 14 .标签蛋白沉淀是
A .研究蛋白质相互作用的技术 B .基于亲和色谱原理
C .常用标签是GST D .也可以是6组氨酸标签E .以上都对 15 .研究蛋白质与DNA在染色质环境下相互作用的技术是
A .标签蛋白沉淀B ?酵母双杂交C ?凝胶迁移变动实验D ?染色质免疫沉淀法E ?噬 菌体显示筛选系统
16 .动物整体克隆技术又称为
A ?转基因技术B ?基因灭活技术C ?核转移技术D ?基因剔除技术 E ?基因转移技术 17 .目前主要克隆的致病基因是
A ?糖尿病致病基因B ?恶性肿瘤致病基因C ?单基因致病基因 D?多基因致病基因E ?高血压致病基因 18 ?基因疫苗主要是指
A . DNA疫苗B . RNA疫苗C .反义核酸D .核酶E .小干扰RNA 19 .目前基因治疗中选用最多的基因载体是
A .噬菌体B .脂质体C .逆转录病毒D .腺病毒相关病毒E .腺病毒 20 .目前基因治疗多采用的方法是
A .基因增补B .基因置换C .基因矫正D .基因灭活E .基因疫苗 （二） B型题
A . Southern blotting B . Northern blotting C . Western blotti ng D . dot blotti ng E . in situ hybridizati on 1 .不需要电泳、转膜等程序
2 .电泳前不需进行限制性内切酶消化 3 .靠电转移完成生物大分子的转移
4 .直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交 A .逆转录PCR B .原位PCR C .实时PCR D .多重 PCR E . RFLP
5 .将目的基因扩增与定位相结合 6.能动态检测反应过程中的产物量
7 .将RNA的逆转录和PCR反应联合应用的一项技术 8 .在同一反应中采取多对引物
A .功能克隆B .定位克隆C .转基因技术 D .核转移技术E .基因剔除 9 .也叫基因靶向灭活
10 .该技术中，被导入的目的基因称为转基因
11 .从对基因编码产物的功能的了解出发克隆致病基因 A .基因疫苗B .基因矫正C .基因置换 D .基因增补E .基因失活
12 .目前基因治疗采用最多的方法是
13 .将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是
14 .将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是
15 .利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是 A .酵母双杂交技术B .标签蛋白沉淀C .电泳迁移率变动测定
D .染色质免疫沉淀E .荧光共振能量转换效应分析 16 .凝胶阻滞实验
17 .需要设计诱饵基因
18 .近年该技术与芯片技术结合在一起，成为一项鉴定特定核蛋白的 DNA结合靶点的 新技术
（三） X型题 1 .核酸探针可以是
A .人工合成寡核苷酸片段 B .基因组DNA片段C . RNA片段 D ? cDNA全长或部分片段E ?核苷酸 2 ?核酸分子杂交可以形成的杂化双链有
A . DNA/DNA B . RNA/RNA C . DNA/RNA D .寡核苷酸 /RNA E .寡核苷酸/DNA
3 . PCR技术主要用于
A.目的基因的克隆B .基因的体外突变C . DNA和RNA的微量分析D . DNA序 列测定E .基因突变分析
4 .分子杂交技术的原理涉及
A .分子杂交特性B .基因文库C .印迹技术D .生物芯片E .探针技术 5 .关于DNA链末端合成终止法正确的是
A ?需加入的链终止剂ddNTPB . dNTP需要标记C ?引物也需要标记 D ?又称Sanger 法 E . ddNTP 缺乏 5 ' -OH
6 .基因组DNA文库建立需要
A .基因组进行限制性内切酶消化 B . DNA片段克隆到相应载体中C .重组体感染 宿主菌D .筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行 E .以入噬菌体为载体 的人基因组DNA文库的克隆数目至少应在10 6以上
7 .用于构建基因组DNA文库的载体有
A .酵母人工染色体B .粘粒C .入噬菌体D .腺病毒E .脂质体 8 .基因诊断较常规诊断其特点有
A .属于病因诊断B .特异性强C .适用范围窄D .灵敏度高E .有放大效应 9 .基因失活的常用技术包括
A .基因疫苗B .核酶C .小干扰RNA D .反义核酸E .基因置换 10 .克隆羊多莉的产生属于
A .同种异体细胞转移技术 B .同种异体细胞核转移技术 C .试管内受精 D .无性繁殖E .同种异体细胞转基因技术 11 .疾病动物模型可用于
A .探讨疾病的发生机制B .克隆致病基因C .新治疗方法的筛选系统 D .新药物的筛选系统E .新疾病模型的筛选系统 12 .蛋白质芯片主要应用于
A .蛋白质结构的研究B .蛋白质表达谱的研究C .蛋白质功能的研究 D .蛋白质之间的相互作用研究 E .疾病的诊断和新药的筛选 13 .研究蛋白质相互作用的技术包括
A .标签蛋白沉淀B .酵母双杂交C .凝胶阻滞实验 D .噬菌体显示筛选系统E . DNA印迹 14 .基因治疗的基本程序包括
A .治疗性基因的选择B .基因载体的选择C .靶细胞的选择D .基因转移 E .回输体内
15 .目前可用作基因治疗的基因载体包括
A .腺病毒相关病毒B .噬菌体C .腺病毒D .逆转录病毒E .粘粒
二、是非题
1 . Southern blot 主要用于RNA的定性和定量分析。
2 .蛋白质印迹分析技术中蛋白质的转移，可以用电转移，也可以靠毛细作用转移。 3 .实时PCR技术与普通PCR技术相比，它可以动态监测反应过程中产物的量。 4 . San ger法在测定核酸序列时，反应管中加入的 dNTP仅标记一种即可。
5 ?生物芯片可以是DNA芯片、cDNA芯片或蛋白质芯片。
6 ?酵母双杂交技术是分析 DNA—蛋白质相互作用的一项重要技术。
7 ?核转移技术，是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核的卵细胞内，使之 发育成个体。
8 ?基因矫正是用正常的基因通过体内基因同源重组，替换致病基因来达到治疗目的。 9 ?目前基因治疗多采用基因增补的方式。
10. RNA印迹技术中，RNA分子在转移前需进行限制性内切酶切割。 11 ? PCR反应中变性主要是使模板DNA完全变性为单链。
12 .实时PCR技术中，TagDNA聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针， 可发挥3 ' -5 '核酸外切酶活性。
13 .酵母双杂交系统可用于证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用的生物信息 学推测。
14 ?转基因技术即动物克隆技术，是无性繁殖。
15 .内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。
16 .基因转移和基因剔除技术在医学中最重要的用途是建立疾病动物模型。 17 .定位克隆是指从对基因编码产物的功能的了解出发来克隆致病基因。
18 .目前DNA序列分析是找出患者有关基因变异所在的最为直接和确切的基因诊断 法。 三、填空题
1 .分子杂交是利用DNA和 这一基本性质来进行DNA或RNA定性、定量分析的
2 .在印迹技术中，将DNA片段在琼脂糖凝胶中 使其成为，利用 使胶中的生物大分 子转移到膜上，使之成为固相化分子。
3 .印迹技术的基本流程依次为、、和。
主要用于定性和定量分析，亦可用于和的分析。 4 . Southern blotting
主要用于检测的表达水平，敏感性较PCR，但其具有和的 5 . Northern blotting 优点。
6 . Western blotting
主要用于检测样品中的存在、细胞中以及的相互作用研究
7 . PCR的基本反应步骤包括、、。
8 .基因芯片适用于分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下的 ，其原理是基于。 9 .在转基因技术中，被导入的目的基因称为 ，目的基因的受体动物称为 。 10 .标签融合蛋白结合实验主要用于证明 是否存在直接的物理结合，分析结合的 及 筛选细胞内与融合蛋白相结合的 。
11 .染色质免疫沉淀法是目前可以研究 与 相互作用的主要方法。 12 .目前克隆致病相关基因主要有 和 两大策略。 13 .根据受体细胞的类型不同，基因治疗分为 的基因治疗和 的基因治疗两大类 14 .目前使用的基因载体有 和 两大类。
15 .在人类基因治疗实施中，导入基因的方式有 和 两大类。 四、名词解释 1 . probe
2 . blott ing tech no loge 3 . gene libary 4 .核转移技术 5 . gene chip
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