重组蛋白制备
1. 将转化有PDI质粒的BL21菌株扩培：4ml LB培养基 + 4ul 10%氨苄（Amp， 100mg/ml，0.45um滤膜过滤，加入体积比1:1000）+40ul 保种的BL21菌液， 于15ml离心管，管盖半紧半松，方便透气，37度摇床，250rpm，9到12小时（过夜）。 2. 菌液进一步扩培：将过夜培养的菌液转移到500ml LB培养基（1L锥形瓶，灭菌），加500ul 10%氨苄，37度摇床，250rpm，待培养基开始明显浑浊后，实时检测吸光度，直至OD600约为0.5。（此时的菌液和第1步过夜培养的菌液，都可用于再保种，保种方法：750ul菌液+250ul 灭菌的50%甘油（甘油：双蒸水=1:1））
3. 向菌液中加入2.5ml IPTG（Solarbio公司，货号18070，储存浓度100Mm，0.45um滤膜过滤，终浓度0.5mM ），37度摇床，250rpm，5小时后收集菌体。
4. 收集菌体：将菌液分装至50ml离心管，每管约40ml，4摄氏度下，3700rpm离心10分钟，弃上清。菌体可保存于-80度冰箱，也可直接裂解提取蛋白。
5. 向菌体中加入裂解液(含1%PMSF和1% Cocktail蛋白酶抑制剂)，每40ml菌液得到的菌体加裂解液2ml，漩涡打碎裂解菌体，冰上静置30分钟。
6. 超声破碎仪破碎：将裂解得菌液合并于50ml离心管，每管不超过30ml，离心管插冰上，用超声破碎仪破碎（40%功率，每超声10秒，停止10秒），直至菌液由粘稠状变为水状。 7. 超声破碎的菌液进行超速离心: 将菌液转移至超速离心管，4摄氏度下，12000rpm离心30分钟，收集上清。8. 向洗脱柱（Bio-Rad公司，货号731-1550）装填约400ul镍珠（GE Healthcare公司，货号17-5318-01），平衡液洗三遍，每遍5ml。
9. 菌液上清过洗脱柱，柱内液体不超过5ml。(菌液上清可过2到三遍，一般两遍)。 10. 洗杂液（可用平衡液代替）过洗脱柱，洗三遍到四遍，每遍5ml。
11. 待洗杂液全部流尽，加入洗脱液，每次250ul，用1.5ml离心管收集，共6支。
12. 将6管洗脱液体分别取5ul，加入到蛋白显色液（Bio-Rad公司，货号500-0205）中，初步判断各管中蛋白的浓度，选取蛋白浓度较高的几支蛋白合并，进行透析。
13. 剪大约6-7cm长的透析袋（Thermo公司，SnakeSkin Dialysis Tubing，货号68035），一端用夹子夹住，加入待透析液体，再用夹子夹住另一端。置于2L透析液中，在4摄氏度的环境下，磁力搅拌器低速搅拌，透析12-18小时。 14. 取出透析液体（蛋白溶液），检测蛋白浓度，标记分装，冻存与-80冰箱。
试剂配方
平衡液/洗杂液:（PH8.0） 50mM Tris 250mM NaCl 30mM 咪唑
裂解液：40ml裂解液配方（现配现用） 40ml平衡液
400ul Triton X-100
40mg溶菌酶（Sigma公司，货号62971-10G-F，终浓度1mg/ml）
37度溶解后，加入400ul PMSF（Sigma公司，货号93482-50ML-F） 洗脱液:（PH7.5-8.0） 50mM Tris 150mM NaCl 500mM 咪唑
透析液：（PH8.0） 50mM Tris 150mM NaCl
5% 甘油
2015年,2017年获苏州大学优秀奖学金三等奖和二等奖
蛋白二硫键异构酶PDI小分子抑制剂PACMA-31对血小板活化血栓形成以及止血的影响.
重组蛋白制备方法
