基于网络药理学探讨参芪地黄汤防治糖尿病肾脏病作用机制-吴琪琪 - 图文

第23卷 第2期 2021 年 2 月

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

辽宁中医药大学学报

Vol. 23 No. 2 Feb .，2021

DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2021.02.011

基于网络药理学探讨参芪地黄汤防治

糖尿病肾脏病作用机制

吴琪琪，佟奕霖，王诗怡，杨宇峰，石岩

（辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110847）

摘要：目的 运用计算机网络药理学方法预测参芪地黄汤（Shengqi Dihuangtang，SDT）防治糖尿病肾脏病

（Diabetic kidney disease，DKD）的作用靶点和信号通路，进一步分析其防治DKD的基础和作用机制。方法 通过中药系统药理学分析平台（TCMSP）采集SDT全方7味中药的有效成分及作用靶标基因；从Gene Cards数据库搜集DKD的靶标基因，将二者取交集获得药物-疾病靶基因并且绘制相关维恩（Venn）图；使用 Cytoscape 3.6.1软件构建药物-相关疾病-潜在活性成分-关键靶点网络；从String数据库构建靶点蛋白互作（PPI）网络；分别进行关键靶点基因本体（GO）分析和基因相互作用（KEGG）通路分析。结果 获得105个活性化合物，药物靶点114个，疾病靶点10 517个，交集靶点109个。关键活性成分主要包括槲皮素（Quercetin）、木犀草素（Luteolin）、异鼠李素（Isorhamnetin）、山柰酚（Kaempferol）。PPI网络关键靶点包括白细胞介素-6（IL-6）、CASP3、血管内皮生长因子（VEGFA）、表皮生长因子受体（EGFR）等。GO分析得出117个功能条目；KEGG富集分析得到113条通路，其中PI3K-Akt信号通路可能是该方发挥作用的主要信号通路。结论 该研究初步预测SDT可能通过靶向作用关键蛋白和重要通路从而达到防治DKD的目的，并有望对中药复方防治DKD提供新的证据和研究思路。

关键词：参芪地黄汤；糖尿病肾脏病；网络药理学；消渴

(2021) 02- 中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1673-842X 0041- 07

Mechanism of Shenqi Dihuang Tang（参芪地黄汤）in Preventing Diabetic Kidney Disease Based on Network PharmacologyWU Qiqi，TONG Yilin，WANG Shiyi，YANG Yufeng，SHI Yan（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，Liaoning，China）Abstract：Objective To predict the target and signal pathway of Shenqi Dihuang Tang（参芪地黄汤，SDT）in the prevention and treatment of diabetic kidney disease（DKD）by using computer pharmacology method，and to further analyze the basis and mechanism of its prevention and treatment of DKD. Methods The effective components and target genes of 7 herbs of SDT were collected with the help of TCMSP. Target genes of DKD were collected from the Gene Cards database，and the two were intersected to obtain drug-disease protein target genes and draw Venn diagram. Using Cytoscape 3.6.1 software to construct drug-disease-active component-key target network；From the String database build target protein interactions（PPI）networks；Gene Ontology（GO）analysis and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）pathway enrichment analysis were performed. Results 105 active compounds，114 drug targets，10 517 disease targets and 109 intersection targets were obtained. The key active ingredients include quercetin，kaempferol，luteolin and isorhamnetin. Key targets of PPI network include interleukin-6（IL-6），Caspase3（CASP3），vascular endothelial growth factor （VEGFA），epidermal growth factor receptor （EGFR），etc. GO function analysis results in 117 function items；According to KEGG enrichment analysis，113 pathways were identified，among which the PI3K-Akt signaling pathway may be the main signaling pathway in which this pathway plays a role. Conclusion This study preliminarily predicted that SDT could prevent and treat DKD by targeting key proteins and important pathways，which is expected to provide new evidence and research ideas for the prevention and treatment of DKD by TCM compound.Keywords：Shenqi Dihuang Tang（参芪地黄汤）；diabetic kidney disease；network pharmacology；Xiaoke糖尿病肾脏病（Diabetic kidney disease，DKD）在过去也被称为糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）。但在2007年，美国肾脏病与透析病人生存质量指导指南（KDOQI）提出使用新的医学术语：糖尿[1]病肾脏病（DKD）。DKD是一种糖尿病微血管并发症，是由于糖尿病引起的肾脏损害，并且目前在全世界范围内已经成为导致终末期肾衰的首要原因[2]。DKD的临床综合征包括持续蛋白尿、肾小球滤过率基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）（2013CB532004）

作者简介：吴琪琪（1996-），女，浙江温州人，硕士研究生，研究方向：中医内科学内分泌疾病。通讯作者：石岩（1963-），男，辽宁沈阳人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中医内科学临床与科研。

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（GFR）持续下降、血压升高、心血管事件增加及其相关病死率增加，与此同时糖尿病透析患者的病死率也比非糖尿病透析患者的病死率高[3]。根据2014年度中华糖尿病学会调查结果显示：我国院内DKD的患病率已经高达40%[4]。本病属于中医疾病范畴里的“水肿、虚劳、关格”等，中医古籍对DKD的症状和病因病机也早有记载。北宋·赵佶《圣济总录》记载：“消肾，小便白浊如凝脂，形体羸瘦”，第一次提出了“消肾”的概念；明·戴原礼《证治要诀》有言：“三消久而小便不臭，反作甜气，在溺中滚涌，更有浮溺，面如猪脂，此精不禁，真元竭也”，当消渴病合并有“尿浊”证候即为“真元竭”，预后不佳[5]。参芪地黄汤（Shengqi Dihuang Tang，SDT）最初见于清·沈金鳌《沈氏尊生书卷三·杂病源流犀烛·大肠病源流》，方药由熟地黄、山药、黄芪、党参、山萸肉、牡丹皮、茯苓7味中药组成，是治疗肠痈气血大虚“溃后疼痛过甚，淋沥不已”的峻补之剂，后人将此方药灵活变换应用于多种疾病[6]。2011年中华中医药学会糖尿病肾病中医防治指南中指出糖尿病肾病中气阴两虚证应以益气养阴为治法，方药采用参芪地黄汤（《沈氏尊生书》）加减，由地黄、山药、党参、黄芪、茯苓、山茱萸、牡丹皮组成[7]。王静[8]研究表明加味SDT能够下调尿中非酶糖基化终产物（AGEs）和蛋白激酶C（PKC）表达水平；改善早期DKD气阴两虚兼血瘀证患者的临床证候；能够减少蛋白尿，改善肾功能，调节糖脂代谢等。长期以来的临床疗效和前期实验研究表明，SDT对防治DKD具有一定的疗效，但历年来一直缺乏系统完善的研究。对此，本文采用近年来迅速发展的网络药理学方法并结合可视化技术，根据中药复方治疗疾病具有多途径、多靶点与多靶点协同作用的特点，从而对SDT治疗DKD的主要活性成分、作用靶点和通路等方面进行深入探讨，以求更为全面地了解SDT的作用机制，为接下来的临床应用以及实验研究提供更为全面的参考依据。1?材料与方法1.1 化学成分及作用靶点构建 借助中药系统药理学数据库（TCMSP）（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）检索组成SDT的7种中药包括党参、黄芪、熟地黄、茯苓、山药、山茱萸、牡丹皮中的化学成分。以类药性（DL）≥0.18和口服生物利用度（OB）≥30%作为评价标准，以此为条件筛选活性成分，筛选出党参、黄芪、熟地黄、茯苓、山药、山茱萸、牡丹皮中的化合物及其对应靶点，并通过Uniprot数据库（http：//www.uniprot.org/）把所筛选出的靶点转换成相对应的基因。1.2 DKD相关靶点获取以“Diabetic kidney disease”为关键词在Gene Cards数据库（https：//www.genecards.org/）检索该疾病的相关靶点，将检索出的靶点进行整合，去掉重复值，构建DKD的相关靶点的疾病数据库。1.3 “SDT-DKD-潜在活性成分-关键靶点”的网络构建与分析将SDT中的潜在活性成分所对应的靶点基因和42

DKD相关的靶点基因利用R语言进行配对，从而获得SDT-DKD的关键靶点即两者的交集基因，并根据交集基因绘制对应的维恩（Venn）图。“SDT-DKD-潜在活性成分-关键靶点”的关系网络由Cytoscape软件（3.6.1）构建。通过该网络探究SDT改善DKD的作用机制。1.4 蛋白互作（PPI）网络的构建 在String数据库平台（https：//string-db.org/）导入SDT-DKD关键靶点并进行PPI分析，设置最低相互作用评分为中等置信度[“medium confidence（0.400）”]，研究物种限定为“人”（“Homo sapiens”），将网络中无联系的节点隐藏，其余参数保持默认设置，从而得到SDT作用于DKD的PPI网络。网络图中浅蓝线和紫色线分别代表从数据库中得来的蛋白间相互作用和已经经过实验验证的蛋白间相互作用。1.5 关键靶点基因本体（GO）分析和基因相互作用通路分析为了进一步说明中药化合物对应的预测靶点在基因功能和通路中的作用，利用Bioconductor平台//bioconductor.org/biocLite.R）、R语言对获得的关键靶点基因依次进行GO分析和KEGG分析，导出GO富集分析表格及KEGG富集分析表格、通路图，并绘制barplot柱状图和dotplot点图。2?结果2.1 SDT活性成分的筛选 借助TCMSP数据库检索SDT中7种中药党参、黄芪、熟地黄、茯苓、山药、山茱萸、牡丹皮中所有化学成分，以化合物的口服利用度OB≥30%，类药性DL≥0.18为筛选阈值共搜集了105个化合物，其中党参21个、黄芪20个、熟地黄2个、茯苓15个、山药16个、山茱萸20个、牡丹皮11 个。2.2 SDT成分改善DKD的潜在作用靶点预测 通过TCMSP数据库将2.1检索得到的105个小分子化合物依次作为关键词进行查询，以Targets Information为查询结果，继而得到各个化合物所对应的靶标蛋白信息，发现这105个小分子化合物的潜在活性成分作用靶点共571个，其中黄芪潜在活性成分的作用靶点209个，党参潜在活性成分的作用靶点94个，熟地黄潜在活性成分的作用靶点16个，茯苓潜在活性成分的作用靶点15个，山药潜在活性成分的作用靶点61个，山茱萸潜在活性成分的作用靶点56个，牡丹皮潜在活性成分的作用靶点120个，去除重复作用靶点后，共计得到114个作用靶点。以“Diabetic kidney disease”为关键词在Gene Cards数据库中进行检索，将检索得到的疾病靶点去掉重复值并进行整合，共计得到靶点10 517个。通过R语言绘制Venn图，获得交集靶点109个，结果见图1。2.3 “SDT-DKD-潜在活性成分-关键靶点”的网络构建与分析通过Cytoscape3.6.1软件对SDT-DKD-潜在活性成分-关键靶点关系数据进行网络的构建，得到了一个包含176个节点（59个活性成分节点、109个靶点节点、7个单味药节点和1个疾病名称节点，其（KEGG）（http： 23卷 辽宁中医药大学学报 中46个活性成分没有与靶点直接相连）和573条连线的网络（各条连线分别表示疾病与靶点、单味药与活性成分、活性成分与靶点之间的联系），其中粉色节点代表疾病，蓝色节点代表疾病与药物活性成分的关键靶点；黄色节点为SDT中的7味药物，橙色节点为SDT中与关键靶点相关的活性成分，每个节点的度值代表和此节点相连接的边的条数，见图2。以 Degree值作为拓扑分析的主要参考依据，排名前四的活性成分依次是槲皮素（Quercetin）、山柰酚（Kaempferol）、木犀草素（Luteolin）、异鼠李素（Isorhamnetin），分别能与78、35、28、18个靶点对接，详见表1。这些度值较高的化合物可能是SDT发挥治疗DKD的关键化合物。度值前六的靶点为NCOA2、PTGS1、PGR、PRSS1、CHRM1、PPARG，其Degree值分别为35、25、21、19、15、15。这体现了中药方剂多成分、多靶点的作用机制。图2 SDT-DKD-潜在活性成分-关键靶点网络2.4 PPI网络的构建及分析 图1 SDT-DKD靶点基因为了更进一步研究SDT防治DKD的作用机制，本研究将SDT-DKD的109个关键靶点导入String数据库平台（https：//string-db.org/）预测蛋白相互作用关系并绘制蛋白关系网络图，设置最低相互作用评分为中等置信度[“medium confidence（0.400）”]，研究物种限定为“人”（“Homo sapiens”），将网络中无联系的节点隐藏，其余参数保持默认设置，得到SDT作用于DKD的PPI网络，见图3。如图3所示，SDT靶蛋白PPI网络有1012条相互作用连线，其中网络图中浅蓝线和紫色线分别代表从数据库中得来的蛋白间相互作用和已经经过实验验证的蛋白间相互作用；有106个节点（有3个靶蛋白未参与蛋白间的相互作用），根据网络间连线节点数目排列，得到PPI网络中核心基因白细胞介素-6（IL-6）、CASP3（CASP3）、血管内皮生长因子（VEGFA）、表皮生长因子受体（EGFR）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）等，见图4、表2。表1 关键活性成分的基本信息分子式结构活性成分Degree值槲皮素（Quercetin）78C15H10O7山柰酚（Kaempfero）35C15H10O6木犀草素（Luteolin）28C15H10O6异鼠李素（Isorhamnetin）18C16H12O743

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图3 SDT-DKD的蛋白关系网络图表2 关键靶点基本信息编号P05231P42574P15692P00533P45983靶基因IL-6CASP3VEGFAEGFRMAPK8靶蛋白白细胞介素-6（Interleukin-6）CASP3（Caspase 3）度值6156血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth 56Factor）表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor 55Receptor）丝裂原活化蛋白激酶8（Mitogen-activated Pro-55tein Kinase 8）2.5 GO富集分析图4 SDT-DKD的PPI网络核心基因GO富集分析结果显示，SDT-DKD的109个潜在关键靶点基因影响了117个生物学过程。GO富集排名靠前的生物学功能主要为DNA结合转录激活活性RNA聚合酶II特异性（16个靶点PGR/AR/ESR1/RELA/RXRB/NR1I3/FOS/TP63/ELK1/HIF1A/MYC/NFE2L2/PARP1/RUNΧ2/IRF1/NR3C1）、泛素样蛋白连接酶结合（12个靶点GSK3B/RELA/BCL2/EGFR/RB1/NFKBIA/CASP8/HIF1A/CCNB1/CHEK2/ERBB3/MDM2）、泛素蛋白连接酶结合（11个靶点GSK3B/RELA/BCL2/EGFR/RB1/NFKBIA/CASP8/44

23卷 辽宁中医药大学学报 HIF1A/CHEK2/ERBB3/MDM2）、类固醇激素受体活性（9个靶点PGR/AR/ESR2/ESR1/PPARG/RXRB/NR1I3/NR3C2/NR3C1）、转录因子活性直接的配体调节序列特异性DNA结合（9个靶点PGR/AR/ESR2/ESR1/PPARG/RXRB/AHR/NR1I3/NR3C1）、核受体活性（9个靶点PGR/AR/ESR2/ESR1/PPARG/RXRB/AHR/NR1I3/NR3C1）等，见图5、图6。图5 SDT-DKD的GO富集分析barplot图图6 SDT-DKD的GO富集分析dotplot图2.6 KEGG富集通路分析对SDT治疗DKD的109个关键靶点基因进行KEGG通路富集分析，共得到113条通路，根据基因数排序（Gene Count），排前5位的通路见表3，分析结果见图7、图8。结果显示关键靶点主要富集于糖尿病并发症中的PI3K-Akt信号通路（PI3K-Akt signaling pathway）、人巨细胞病毒感染（Human cytomegalovirus infection）、卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒感染（Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection）、乙肝（Hepatitis B）、癌症中蛋白聚糖（Proteoglycans in cancer）等相关通路，图9为PI3K-Akt信号通路。综上提示SDT是通过多条信号通路来发挥治疗DKD的作用的。3?讨论中药复方是根据药量、药性、配伍关系等组成的中药处方，以辨证论治为指导思想，以整体观念为理论基础，同时中药复方具有多成分、多途径、多靶点的特点；现如今计算生物学、多向药理学、系统生物学等多学科技术发展迅速，从系统、整体角度研究药物机制的网络药理学是近年来一种新的研究方法，与中药复方基本特点相吻合[9]。表3 SDT-DKD的KEGG通路富集分析编号通路富集基因基因计数hsa04151PI3K-Akt signal-CHRM1/CHRM2/GSK3B/RELA/IKBKB/21ing pathwayBCL2/EGFR/VEGFA/CCND1/CASP9/IL6/RAF1/PRKCA/ERBB2/MYC/NOS3/IGF2/ERBB3/MDM2/MCL1/MTORhsa05163Human cytomeg-GSK3B/RELA/IKBKB/CASP3/EGFR/VEGFA/19alovirus infectionCCND1/CASP9/RB1/IL6/ELK1/NFKBIA/CASP8/RAF1/PRKCA/MYC/PTGER3/MDM2/MTORhsa05167Kaposi sarcoma-GSK3B/RELA/IKBKB/CASP3/MAPK8/18associated her-ICAM1/VEGFA/CCND1/FOS/CASP9/RB1/pesvirus infectionIL6/NFKBIA/CASP8/RAF1/HIF1A/MYC/MTORhsa05161Hepatitis BRELA/IKBKB/BCL2/CASP3/MAPK8/FOS/17CASP9/RB1/IL6/ELK1/NFKBIA/CASP8/RAF1/PRKCA/MYC/BIRC5/PCNAhsa05205Proteoglycans in ESR1/CASP3/EGFR/VEGFA/CCND1/PLAU/17cancerELK1/RAF1/PRKCA/HIF1A/ERBB2/CAV1/MYC/IGF2/ERBB3/MDM2/MTOR图7 SDT-DKD的KEGG 通路富集分析barplot图图8 SDT-DKD的KEGG 通路富集分析dotplot图45

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图9 PI3K-Akt 信号通路本研究借助TCMSP中药系统药理学分析平台，以口服利用度OB≥30%，类药性DL≥0.18作为筛选条件得到了SDT的105个活性成分，在Gene Cards疾病数据库中检索、整合、去重建立DKD靶点数据库，取交集获得SDT-DKD的关键靶点。构建SDT-DKD-潜在活性成分-关键靶点网络，得到Degree值排名前四的活性成分依次是槲皮素（Quercetin）、山柰酚（Kaempferol）、木犀草素（Luteolin）、异鼠李素（Isorhamnetin）。其中槲皮素是一种具有抗炎、抗癌、降糖、神经保护和抗过敏等生物活性的植物多酚，是一种潜在的抗糖尿病物质，研究结果表明槲皮素摄入量与中国人群中2型糖尿病患病率呈负相关，并且有假说表明槲皮素在10、25和50 mg/kg剂量下能够降低血糖水平，提示槲皮素对2型糖尿[10-11]病有保护作用。DILIP S等[12]利用大鼠（NRK-52E）和人肾小管上皮细胞（RPTEC）进行体外实验，研究山柰酚的分子机制，研究表明山柰酚可以抑制高血糖诱导的RhoA激活，降低NRK-52E和RPTEC细胞的氧化应激、促炎细胞因子（TNF-α和 IL-1β）和纤维化（TGF-β1表达、细胞外基质蛋白表达）；这令山柰酚有希望成为治疗糖尿病肾病的潜在药物。此外，也有研究表明山柰酚衍生物（Kaempferol-derivatives）对α-淀粉酶具有较强的抑制作用[13]。CHEN L V等[14]给链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠口服木犀草素（Luteolin），剂量为-1-110、20 mg·kg·d，持续4周。测定血尿酸、肌酐、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、血清胰岛素水平和口服葡萄糖耐量试验（OGTT），检测肾脏病理改变。发现木犀草素可恢复链脲佐菌素诱导的小鼠胰岛素抵抗、血脂异常、高尿酸血症和肾脏炎症细胞浸润，并且木犀草素抑制了RIP140/NF-κB通路，改善了链脲佐菌素所致小鼠肾损伤的胰岛素信号通路，这表明木犀草素对糖尿病肾病的治疗作用与其调节RIP140/NF-κB和胰岛素途径有关。NIDA J R等[15]发现异鼠李素（Isorhamnetin）作为神经保护剂对糖尿病相关的脑改变具有潜在的作用。由此可见这些度值排名较前的化合物可能是SDT发挥治疗DKD作用的关键成分。通过String数据库建立的PPI网络分析，结果提示SDT-DKD关键靶点涉及IL-6、CASP3、VEGFA、[16]EGFR等。黄敬泽等研究结果显示，早期糖尿病肾病患者尿IL-6水平明显较单纯糖尿病（DM）组升高，且相关分析表明尿IL-6水平与尿白蛋白排泄率（UAER）呈正相关，预测糖尿病肾病患者肾组织表达高水平的IL-6可能参与了糖尿病肾病发生发展的病理生理过程，并且尿IL-6水平可作为临床观察糖尿病肾病病情的一项参考指标。有研究表明在细胞线粒体膜受到损伤的情况下，线粒体内的细胞色素会释放到细胞外通过激活CASP3从而诱导细胞凋亡的发生，所以CASP3可能是诱导线粒体凋亡的关键介质[17]。因此预测SDT可能通过抑制CASP3通路的激活，从而减少肾细胞的凋亡，以此保护肾脏。VEGFA是最主要的血管内皮生长因子，在血管生成、肿瘤生长以及缺血性疾病中扮演着重要角色，在肾脏发育过程中足细胞VEGFA水平的上调、下调[18]将导致肾小球疾病。足细胞损伤是糖尿病肾小球损伤的典型标志，CHEN J等[19]利用足细胞特异性EGFR缺失的小鼠进行的研究结果表明，EGFR的46

23卷 辽宁中医药大学学报 激活在激活介导糖尿病肾病足细胞损伤和丢失的通路中发挥了重要作用。由此推测SDT可能通过抑制EGFR保护足细胞从而减轻DKD患者的蛋白尿，延缓疾病进展。同时EGFR属于酪氨酸激酶型受体，与其配体结合后可激活RAS-MAPK、PI3K-Akt信号通路调节DNA复制进而调节细胞增殖、分化与生长[20]，也有研究表明外周组织胰岛素抵抗及2型糖尿病发生的最基本机制之一是PI3K-Akt信号传导通路的阻滞[21]。GO功能富集分析结果显示SDT治疗DKD涉及多个生物学过程并通过作用多个靶点来发挥作用，主要集中于DNA结合转录激活活性RNA聚合酶II特异性、泛素样蛋白连接酶结合、泛素蛋白连接酶结合、类固醇激素受体活性、转录因子活性直接的配体调节序列特异性DNA结合、核受体活性等。通过KEGG富集分析发现关键靶点主要富集于PI3K-Akt信号通路、卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒感染、人巨细胞病毒感染、乙肝、癌症中蛋白聚糖等相关通路。研究表明PI3K-Akt信号通路通过对FoxO1和GSK3等下游分子的活性调节，不仅对葡萄糖转运具有重要的调控作用，而且对糖异生基因及脂肪酸合成基因的表达具有重要的调控作用[21]。正常的PI3K-Akt信号通路对胰岛β细胞分泌胰岛素具有重要作用，不但可以减轻胰岛素抵抗，而且还可以促进外周靶组织摄取葡萄糖；总之，PI3K-Akt信号通路在胰岛β细胞的增殖、生长、再生、凋亡和分泌胰岛素等方面发挥着重要作用[22]。除遗传因素外，病毒感染也可以致胰岛β细胞损伤，从而引起血糖调节受损[23]。但排名靠前的另外几条通路：卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒感染、人巨细胞病毒感染、乙肝病毒感染等目前尚未有文献研究表明与胰岛β细胞损伤有关。4?小结参芪地黄汤作用于糖尿病肾脏病是多靶点、多通路、多功能的复杂网络结构机制。本研究结果为参芪地黄汤治疗糖尿病肾脏病提供了思路和参考方向，也为中医药多靶点防治疾病提供一定的参考价值。由于网络药理学的研究基础是数据研究，那么活性成分筛选的标准不同、数据搜集是否全面、靶标预测方法是否准确合理等都会对研究结果造成影响。此外，由于尚不能完全揭示药物在生物体内状况，尚未考虑到药物剂量及煎服方法对治疗结果的影响，因此还需要相应的药效机制实验进行进一步的验证。在该研究中，对于一些没有与糖尿病肾脏病相关报道的化合物、靶点及通路可能原因是这些化合物对糖尿病肾脏病并没有治疗作用，与糖尿病肾脏病的发生及治疗机制也并不相关；或者是这些化合物、靶点、通路还未曾被研究是否与糖尿病肾脏病有关，这就希望在今后的研究中，能以网络药理学研究方法为基点，更进一步展开实验研究工作用以阐明中药复方在防治疾病的过程中多通路、多靶点的复杂机制。◆参考文献[ 1 ] KDOQI. KDOQI clinical practice guidelines and clinical practice recommendations for diabetes and chronic kidney disease[ J ] . American Journal of Kidney Diseases，2007，49：S12-S154. [ 2 ] REIDY K，KANG HM，HOSTETTER T，et al. Molecular mechanisms of diabetic kidney disease[ J ] . Journal of Clinical Investigation，2014，124 ( 6 )：2333-2339.[ 3 ] LIN Y C，CHANG Y H，YANG S Y，et al. Update of pathophysiology and management of diabetic kidney disease[ J ] . Journal of the Formosan Medical Association，2018，117 ( 8 )：671.[ 4 ] 中华医学会糖尿病分会.中国2型糖尿病防治指南（2013年版）[ J ] .中国糖尿病杂志，2014，22 ( 8 )：2-42.[ 5 ] 范婷，杨晓晖，李怡，等.糖尿病肾病的中医临床研究进展[ J ] . 北京中医药，2019，38 ( 10 )：1036.[ 6 ] 徐伶俐.闫镛教授应用参芪地黄汤治疗糖尿病肾病经验[ J ] . 中国中医药现代远程育，2017，15 ( 12 )：83.[ 7 ] 高彦彬，刘铜华，李平.糖尿病肾病中医防治指南[ J ] .中国中医药现代远程教育，2011，9 ( 4 )：152.[ 8 ] 王静. 加味参芪地黄汤对早中期气阴两虚兼血瘀型DKD患者AGEs及PKC表达的影响[ D ] .哈尔滨：黑龙江省中医药科学院，2019.[ 9 ] 陶嘉磊，汪受传，陈彦臻，等.中药复方网络药理学研究述评[ J ] . 中华中医药杂志，2019，34 ( 9 )：3903-3904.[ 10 ] BULE M，ABDURAHMAN A，NIKFAR S，et al. Antidiabetic effect of quercetin：A systematic review and meta-analysis of animal studies[ J ] . Food and Chemical Toxicology，2019，125：494-502.[ 11 ] YAO Z，GU Y，ZHANG Q，et al. Estimated daily quercetin intake and association with the prevalence of type 2 diabetes mellitus in Chinese adults[ J ] .European Journal of Nutrition，2019，58 ( 2 )：819-830.[ 12 ] DILIP S，PIYUSH G，VIOND T，et al. Kaempferol attenuates diabetic nephropathyby inhibiting RhoA/Rho-kinase mediated inflammatory signalling[ J ] .Biomedicine & Pharmacotherapy，2019，109：1610-1619. [ 13 ] YIN PP，YANG LG，XUE Q，et al. Identification and inhibitory activities of ellagic acid-and kaempferol-derivatives from Mongolian oakcups against α-glucosidase，α-amylase and proteinglycation linked to type II diabetes and its complications and their influence on HepG2 cells' viability[ J ] .Arabian Journal of Chemistry，2018，11：1247-1259. [ 14 ] CHEN L Y，TIAN G W，TANG W D，et al. Protective effect of luteolin on streptozotocin-induced diabetic renal damage in mice via the regulation of RIP140/NF-кB pathway and insulin signalling pathway[ J ] .Journal of Functional Foods，2016，22：93-100. [ 15 ] NIDA JR，TOURANDOKHT B，MEHRDAD R，et al. Isorhamnetin exerts neuroprotective effects in STZ-induced diabetic rats via attenuation of oxidative stress，inflammation and apoptosis[ J ] .Journal of Chemical Neuroanatomy，2019，102：101709. [ 16 ] 黄敬泽，王健，黄培基，等.Ⅱ型糖尿病患者血、尿白介素-6变化的意义[ J ] .中国免疫学杂志，2002，18 ( 10 )：729-731.[ 17 ] LAKHANI SA，MASUD A，KUIDA K，et al. Caspases 3 and 7：key mediators of mitochondrial events of apoptosis[ J ] .Science，2006，311 ( 5762 )：847-851.[ 18 ] KATHERINE C，DOLORES V，ALICIA C，et al. Cellular and molecular aspects of diabetic nephropathy；the role of VEGF-A [ J ] . Nefrologia，2015，35 ( 2 )：131-138.[ 19 ] CHEN J，CHEN JK，RAYMONFD C HARRIS. EGF receptor deletion in podocytes attenuates diabetic nephropathy[ J ] . J Am Soc Nephrol，2015，26 ( 5 )：1115-1125.[ 20 ] MINA G，JPDN L，PEDRO A，et al.Cost-effectiveness of pembrolizumab as first-line therapy for advanced non-small cell lung cancer[ J ] .Lung Cancer，2018，10 ( 124 )：248-254.[ 21 ] 迟毓婧，李晶，管又飞，等.PI3K-Akt信号传导通路对糖代谢的调控作用[ J ] .中国生物化学与分子生物学报，2010，26 ( 10 )：879-885.[ 22 ] RICCARDA G，FABIO S，LUIGI B，et al.Acylated and unacylated ghrelin promote proliferation and human islets：involvement of 3’，5’-cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A，extracellular signal-regulated kinase 1/2，and phosphatidyl inositol 3-kinase/Akt signaling[ J ] .Endocrinology，2007，148 ( 2 )：512-529.[ 23 ] 张君，江晓静.巨细胞病毒感染与糖尿病发病机制研究进展 [ J ] .中国感染控制杂志，2016，15 ( 1 )：68-72.47