HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的

HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构

建及在大肠杆菌中的高效表达

李存枚;潘卫;曹洁;王锦红;黄德圣;庞强;廖文婷;邓松华

【期刊名称】《安徽医科大学学报》 【年(卷),期】2009(044)001

【摘要】目的 构建HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coli B121(DE3)中进行高效表达和纯化.方法 应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(AC)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定.结果 构建了pET32a-Tat(cn)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17 mg/nd,相对分子质量为31 ku.间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应.结论 成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1 Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1 Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论.

【总页数】5页(5-9)

【关键词】HIV-1/遗传学;大肠杆菌/遗传学;基因产物,tat;基因表达 【作者】李存枚;潘卫;曹洁;王锦红;黄德圣;庞强;廖文婷;邓松华

【作者单位】安徽医科大学病理生理学教研室,合肥230032;第二军医大学微生

物学教研室,上海200433;第二军医大学微生物学教研室,上海200433;第二军医大学微生物学教研室,上海200433;安徽医科大学病理生理学教研室,合肥230032;第二军医大学微生物学教研室,上海200433;第二军医大学微生物学教研室,上海200433;安徽医科大学病理生理学教研室,合肥230032 【正文语种】中文

【中图分类】R373.51;R378.2;R394;R392.11 【相关文献】

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3.大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)无毒突变体mLT63在大肠杆菌中的融合表达及纯化 [J], 白雪飞; 郗园林; 段广才

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