绿木霉ZY-01中纤维素酶EGⅣ基因的克隆及其在E.coli中的原核表达

绿木霉ZY-01中纤维素酶EGⅣ基因的克隆及其在E.coli

中的原核表达

胡 侨，罗 伟，阮 涛，侯亚利，黄 皓，杨忠华

【摘 要】摘要：以前期筛选到的纤维素酶高产菌株绿木霉T.viride ZY-01的总RNA为模板，利用RT-PCR技术克隆出内切葡聚糖酶EGⅣ基因，连接至pET-28a构建出重组质粒，并转化至E.coli BL21(DE3)中表达。该EGⅣ基因约有1089 bp，在启动子T7lac的控制和IPTG的诱导下，目的基因成功地在原核细胞中表达。通过SDS-PAGE检测得出目标蛋白分子量为39 kDa，重组酶的比酶活为1.05 U/mg，该酶最适pH值为6、最适反应温度为50 ℃。 【期刊名称】武汉科技大学学报（自然科学版） 【年(卷),期】2016(039)002 【总页数】5

【关键词】绿色木霉；纤维素酶；内切葡聚糖酶；EGⅣ基因；基因重组；原核表达

纤维素是自然界中最丰富、最廉价的有机可再生资源，而纤维素酶是生物转化纤维素过程中的一类复合酶，主要由内切葡聚糖酶EG、外切葡聚糖酶CBH和β-葡糖苷酶BG等组成，其中，EG酶主要作用于纤维素内部的非结晶区，能随机地在纤维素分子内部降解β-1,4糖苷键，使长链纤维素分子分解成大量含非还原性末端的小分子纤维素。由于EG酶在降解纤维素的过程中起着至关重要的作用，因此对其基因克隆和表达的研究成果有不少，其中部分是在酵母表达系统中表达[1-3]，但酵母表达系统较复杂，并且存在表达量较低等问题，而原核表达系统有很多优点，如遗传图谱明确、遗传背景清楚、菌株培养操作简单