重度慢性乙型肝炎患者的病毒耐药突变检测
阎纳新 霍建峰 芦飞 杜婧 李铁牛 赵召霞 戴二黑
【摘 要】【摘 要】 目的 探讨石家庄地区重度慢性乙型肝炎患者HBV耐药突变的状况。方法 对51例2012年1月至2013年12月在石家庄市五医院就诊的重度慢性乙型肝炎患者进行HBV P区基因序列测定。结果 51例重度慢性乙型肝炎患者中，25例存在HBV P区发生突变，突变率为49.0%。突变率在HBeAg阳性组和阴性组之间无显著差别(P＞0.05)。HBV P区突变组血清HBV DNA水平显著高于未突变组(P ＜0.05)，ALT、AST和TBIL在突变组也显著升高(P＜0.05)。对25例存在HBV P区基因突变患者进行突变模式分析，居于前四位的突变模式的总和占所有突变的72%。突变模式主要为rtM204I/V单独突变以及联合rtL180M和(或)其他突变位点、rtA181V/T单独突变以及联合rtN236T或rtM250V/L突变。结论 重度慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定及阿德福韦酯等进行抗病毒治疗过程中，应实时监测HBV P区耐药突变状况，及时调整用药。
【期刊名称】河北医药 【年(卷),期】2014(000)024 【总页数】3
【关键词】【关键词】 肝炎，乙型，慢性，重度;核苷(酸)类似物;耐药;突变 慢性乙型肝炎是我国常见的慢性传染病之一，其中慢性乙型肝炎患者中约1%发生重症化，预后差。虽然乙型肝炎的抗病毒治疗已取得长足进展，然而重症乙型肝炎的发病率未显著下降，究其原因可能与乙型肝炎病毒(HBV)基因型、HBV耐药变异和HBV再活化以及合并感染等因素有关。本研究收集51例石家
庄地区的重度慢性乙型肝炎患者，分析患者体内HBV的耐药位点变异情况，旨在探讨石家庄地区重度慢性乙型肝炎患者HBV耐药突变的状况，为重度慢性乙型肝炎的预防和治疗提供科学依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 51例患者均为2012年1月至2013年12月在石家庄市第五医院就诊的重度慢性乙型肝炎患者，其中男40例，女11例;年龄22～66岁，平均年龄(44.7±11.6)岁。诊断标准依据中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会修订的《病毒性肝炎防治方案》［1］。其中HBeAg阳性35例，HBeAg阴性16例。在获取患者知情同意后留取血清标本，保存于－70℃冰箱内待测。
1.2 仪器与试剂 主要仪器包括ABI 7300实时荧光定量PCR仪、CEQ8000测序仪以及美国雅培C8000全自动生化分析仪。主要试剂包括乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药突变核酸测序试剂盒(北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司提供)和血清HBV DNA荧光定量检测试剂盒(中山大学达安基因股份有限公司)。 1.3 方法
1.3.1 血清 ALT、AST、TBIL和 HBV 标志物的检测:采用雅培C8000全自动生化分析仪检测血清ALT、AST和TBIL。采用ELISA法检测乙肝五项，试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司提供。
1.3.2 血清HBV DNA检测:血清HBV核酸提取采用煮沸裂解法，采用荧光定量 PCR技术检测HBV DNA载量。
1.3.3 HBV基因型及耐药突变核酸测序检测:实验方法及步骤参照北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司的HBV基因型及耐药突变核酸测序检测说明书，结果分
析应用 BLAST和 DNAstar等软件将测序结果与GenBank的标准序列比对，确定基因型和突变位点。
1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 重度慢性乙型肝炎患者HBV P区突变情况 51例重度慢性乙型肝炎患者中，26例未发生突变，25例存在HBV P区发生突变，突变率为49.0%。突变与未突变比率在HBeAg阳性组和阴性组之间无显著差别(P ＞0.05)。见表1。 2.2 重度慢性乙型肝炎HBV P区突变组与未突变组临床资料比较 HBV P区突变组HBV DNA水平显著高于未突变组，ALT、AST和TBIL在突变组也显著升高。见表2。
2.3 重度慢性乙型肝炎患者HBV P区突变模式分析
对25例存在HBV P区基因突变患者进行突变模式分析，结果显示居于前四位的突变模式的总和占所有突变的72%。突变模式主要为rtM204I/V/S单独突变以及联合rtL180M和/或其他突变位点、rtA181V/T单独突变以及联合rtN236T或rtM250V/L突变。见表3。
3 讨论
HBV耐药类型分为基因型耐药、病毒耐药和临床耐药。基因型耐药是指HBV基因组出现某些特定的基因突变;病毒耐药是指在基因型耐药的基础上，HBV DNA上升出现一个log10以上的变化或者由阴性变为阳性;临床耐药是指在病毒耐药的基础上出现ALT显著升高或者肝脏组织学损伤加重［2］。上述三者之间是依次发生的过程。慢性乙型肝炎患者体内HBV在药物和自身免疫力的双重
重度慢性乙型肝炎患者的病毒耐药突变检测
