大肠杆菌测试片检测效果验证报告
一、 试验目的
通过用大肠杆菌测试片与国标方法对不同食物样本中大肠杆菌进行检测，将结果进行对比分析，验证其准确度，并对测试片检测效果进行综合评价。 二、 试验材料及设备 A) 材料
瓶装水、袋装鲜奶、酸奶、生鸡肉、熟猪肉、鲜虾、速冻水饺、面包、肉松蛋糕、生菜叶、巧克力、酸奶、瓶装果汁、葡萄、大肠埃希氏菌株（ATCC 12900）。 B) 培养基及试剂
中性红胆盐琼脂（VRBA）、结晶紫中性红胆盐MUG琼脂（VRBA-MUG）培养基、煌绿乳糖胆盐（BGLB）、BHI 肉汤、生理盐水、1M HCL 和 NaOH 等。 C) 仪器及耗材
均质机、恒温恒湿培养箱、高压灭菌锅、大肠菌群测试片（贵州勤邦）、平板、移液管、均质袋等。 三、 试验流程 1、样品的处理及稀释
瓶装水、袋装鲜奶、酸纸片奶、熟猪肉、面包、肉松蛋糕、巧克力、酸奶、瓶装果汁样品在均质过程中添加一环大肠杆菌（ATCC 12900）培养物作为对照，生鸡肉、鲜虾、速冻水饺、生菜叶、葡萄不作处理，处理均参照 GB4789.38-2012 中 规定6.1 进行。 2、检测流程----国标方法（GB4789.38-2012）,见图1。
3、检测流程----测试纸片（参照测试片说明书进行培养和菌落计数），见图1。 四、 验证指标 1、符合度
同时以国标方法和测试片法进行大肠菌群测定，分别对不同样品进行检测计数。符合度计算公式如下：
M：样品国标方法测得大肠杆菌菌落数量（CFU/mL或g） Mx：样品测试片法测得大肠杆菌菌落数量（CFU/mL或g）
图1. 国标方法和试纸片检测方法流程图
五、 实验结果及分析 A、试纸片外观及菌落判读
试纸产品初始外观完整，合格率较高，在本次试验中共计72片试纸中发现有4片试纸产品覆膜与识别区内培养基局部黏连外，其他均正常。试纸产品识别区内初始添加样本稀释液后，培养基快速凝固，覆膜平整无气泡，外观表现优秀，见图2。
试纸产品在样品稀释倍数较小时易受样品基质影响，本实验样品稀释倍数为101-3，部分样本检测试纸产品有效判断时间之内由固体转变为液体状态，识别区内培养基液化外流，影响计数及判断（图2）；
试纸产品在对杂菌较复杂的样本（生菜、水果、肉类等）检测时产品识别区内受杂菌影响产生大量气泡（图2），无法有效对目标菌进行判断计数。 B、试纸片检测方法符合率
国标方法在培养基平板上出现紫红色菌落且在荧光下显示蓝色，在纸片上均未出现典型可疑菌落（图3），试纸片方法和国标方法检测部分结果见表1。 样品 瓶装水 果汁 鲜奶 酸奶 面包 蛋糕 巧克力 熟肉 葡萄
处理 方法 阳性添加 阳性添加 阳性添加 阳性添加 阳性添加 阳性添加 阳性添加 阳性添加 无处理
培养 温度 36℃ 36℃ 36℃ 36℃ 36℃ 36℃ 36℃ 36℃ 36℃
培养 时间 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h
取样量 国标法检测结果试纸片检测结果符合率 （g/mL）（ CFU/mL/g） （CFU/mL/g） 1 25 25 25 25 25 25 25 25
2.3E+03 2.2E+03 2.3E+03 2.5E+03 2.1E+03 2.0E+03 2.3E+03 2.4E+03 3.4E+0.2
0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0
生菜 生肉 鲜虾 水饺 无处理 无处理 无处理 无处理 36℃ 36℃ 36℃ 36℃ 24h 24h 24h 24h 25 25 25 25 3.7E+0.2 多不可计数 1.7E+0.2 多不可计数 0 0 0 0 0 0 0 0
表1 试纸片方法和国标方法检测结果
六、结论
通过不同食物样本未处理或添加阳性质控菌处理后，用国标方法和大肠杆菌测试纸片方法分别对大肠杆菌进行计数，结果表明试纸片方法无法准确完成食品中大肠杆菌计数的目的。需要对纸片生产工艺进行进一步改进和优化。
图2 试纸片外观及菌落形态
图3 试纸片方法和国标方法检测部分结果图
大肠杆菌测试片验证报告
