。 。 内部文件，版权追溯 内部文件，版权追溯 内部文件，版权追溯 第2讲 微生物的实验室培养
一、单项选择题
1. (2016·盐城三模)下列有关微生物培养的叙述,错误的是 ( ) A. 培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌
B. 各种微生物培养基的配方中必须包含碳源、氮源、水、无机盐及琼脂等成分 C. 纯化培养微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法 D. 以尿素为唯一氮源的培养基可以选择培养分解尿素的微生物 2. 下列有关常见无菌操作的叙述,错误的是( ) A. 用酒精擦拭双手 B. 用氯气对水源消毒
C. 实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D. 玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭
3. 如下图所示,自来水经滤膜过滤后,转移到牛肉膏蛋白胨培养基上,适宜条件下培养48 h,染色后统计变色菌落数目为165个。下列说法正确的是 ( )
A. 若培养基含伊红—美蓝,大肠杆菌菌落呈蓝绿色
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B. 自来水中大肠杆菌浓度是33个·L,比真实值偏大 C. 为了提高准确度,需设重复实验,但不用空白对照 D. 若培养基菌落数目大于300,可适当减少自来水量
4. 下列关于微生物培养所需营养物质的叙述,正确的是 ( ) A. 凡是碳源都能提供能量 B. 碳源物质不可能同时是氮源 C. 无机氮源也能提供能量
D. 除水以外的无机物只提供无机盐
5. (2016·南通三模)下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是 ( ) A. 应根据微生物代谢类型选择合适培养基并控制好培养基pH B. 实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触 C. 待培养基冷却至室温后,在酒精灯火焰附近倒平板 D. 使用过的培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃
6. 下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述,错误的是 ( ) A. 培养基应先调pH再进行灭菌 B. 培养基应先灭菌再分装到培养皿 C. 溶化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦
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D. 高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓
7. (2016·南京一模)下列有关用平板划线法和稀释涂布平板法纯化培养大肠杆菌的叙述,正确的是( )
① 都需要用固体培养基 ② 都需要使用接种针进行接种 ③ 都需要在火焰旁进行接种 ④ 都可以用菌落数来计数活菌 A. ①② B. ①③ C. ②④ D. ③④
8. (2016·南通二模)在分离、纯化大肠杆菌实验中,划线接种(甲)、培养结果(乙)如下图。有关叙述错误的是 ( )
A. 接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌
B. 连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 C. 接种过程中至少需要对接种环灼烧5次 D. 甲中a区域为划线的起始位置
9. (2016·南京三模)苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如下图所示,①为土壤样品。下列相关叙述错
误的是 ( )
A. 使用平板划线法可以在⑥上获得单个菌落
B. 如果要测定②中活细菌数量,常采用稀释涂布平板法
C. 图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源 D. 微生物培养前,需对培养基和培养器皿进行消毒处理
10. (2016·苏州一模)科研人员利用实验室保藏的酵母及市场上出售的面包酵母菌种,设计了相关实验,成功培育出能在-20 ℃条件下冷冻保存56 d,存活率达到90%以上的耐冻性面包酵母菌菌种。下列有关叙述错误的是 ( ) A. 酵母菌能利用蛋白胨作为碳源与氮源
B. 在配制培养基时可选择添加适宜种类和浓度的抗生素
C. 应将不同来源的菌株接种到培养液后置于-20 ℃条件下冷冻保存56 d D. 应采用稀释涂布平板法和平板划线法分别测定冷冻培养前后的活菌数 二、 多项选择题
11. (2016·泰州一模)下列操作中,能防止杂菌污染的有 ( ) A. 早期胚胎的培养液中添加维生素 B. 分离酵母菌的培养基中添加青霉素 C. 腐乳装瓶腌制时在近瓶口处加大用盐量 D. 微生物培养时在酒精灯火焰旁倒平板
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12. (2017·启东模拟)下列有关平板划线接种法的操作,正确的是 ( ) A. 将接种环放在火焰上灼烧
B. 将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液 C. 蘸取菌液和划线要在火焰旁进行
D. 划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
13. (2016·淮安模拟)某生物科技小组的同学用刚果红染色法从土壤中分离得到了能够分解纤维素的微生物,下列有关此实验历程的阐述,错误的是 ( ) A. 本实验既可以起到选择培养的作用又可以起到鉴别培养的作用
B. 纤维素的分解产物纤维二糖和葡萄糖能与刚果红作用形成红色的复合物 C. 涂布平板时,应用涂布器沾少量菌液并转动培养皿以使菌液涂布均匀 D. 应只选择平板中有较大透明圈的菌落进行计数 三、 非选择题
14. (2016·苏州一模)某研究小组将一组相同圆纸片放入不同浓度的麦迪霉素(一种抗生素)溶液中浸泡后,放在接种有大肠杆菌的培养基上培养,实验结果如下图1。请分析并回答下列
问题:
(1) 将装有培养基的灭菌包装入高压蒸汽灭菌锅时,注意不要装得太挤,以免因 而影响灭菌的效果。加热初期,必须将灭菌锅内的冷空气排尽,否则将因 而影响灭菌的效果。倒平板时,待平板冷却凝固后,应将平板倒过来放置,并用记号笔在 上标明培养基的种类、培养日期、平板上样品的稀释度、培养微生物名称及制作者姓名等信息。
(2) 实验结果表明,对大肠杆菌抑制作用最明显的是浓度为 (填图1中序号)的麦迪霉素。
(3) 该实验中,宜使用 法接种大肠杆菌,在培养和接种大肠杆菌时要特别注意进行无菌操作。为了避免无关变量对实验结果的影响,对圆纸片的要求是 。
(4) 该研究小组运用上述实验方法,还研究了相同浓度的三种不同抗生素A、B、C对大肠杆菌生长的影响。请在上图2以图示的方法表示这一处理方案(可模仿图1中图示并加以必要注解的方法)。
15. (2016·常州一模)自生固氮菌可不与其他植物共生,能独立完成固氮作用,在农业生产中具有广泛的用途。研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株,并对其固氮能力进行了研究。请回答下列问题:
(1) 在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中,下列选项不需要的是 (填序号)。 ① 酒精灯 ② 接种环 ③ 高压蒸汽灭菌锅 ④ 棉塞
(2) 要从土壤样品中分离出自生固氮菌,在获得土壤浸出悬液后,可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于 培养基上进行筛选。
(3) 在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是 。
(4) 涂布培养4 d后,可通过观察 的形态特征来统计土壤中自生固氮菌的种类。
(5) 为了进一步筛选高效固氮菌,研究人员将上述获得的等量的4种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后,对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量,结
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果见下表:
甲 菌 乙 菌 丙 菌 丁 菌 菌量5555/(个 2.1×10 2.5×10 1.8×10 2.0×10 -1·mL) 含氮量3.32 4.38 5.34 5.32 /K
① 培养过程中需不断振荡的目的是 。
② 可以采用 方法对固氮菌进行计数,假设计数室长和宽均为1 mm,深0.1 mm,每个小方格中平均有7个固氮菌,则10 mL培养液中有固氮菌的数量为 个;如果小方格中固氮菌的数量太多,无法数清,则应 。
③ 由上述结果可知, 菌的固氮效率最高。
第2讲 微生物的实验室培养
1. B 【解析】 各种微生物培养基的配方中必须包含碳源、氮源、水、无机盐,但不一定有琼脂。
2. D 【解析】 用酒精擦拭双手属于使用化学药剂消毒;用氯气消毒水源也属于使用化学药剂消毒;实验操作应在酒精灯火焰附近进行,因为高温可防止杂菌污染;玻璃器皿(吸管、培养皿)等应用干热灭菌法灭菌,利用酒精擦拭不能将所有微生物杀灭。 3. D 【解析】 若培养基含伊红—美蓝,大肠杆菌菌落呈黑色或紫黑色且有金属光泽,A错误;
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自来水中大肠杆菌浓度是165÷5=33个·L,因为两个或多个大肠杆菌可能长成一个菌落,因此比真实值偏小,B错误;为了提高准确度,需设重复实验,同时需要设置空白对照,C错误;若培养基菌落数目大于300,可适当减少自来水量,D正确。
4. C 【解析】 无机碳源不提供能量;有些物质可以既作碳源又作氮源,如牛肉膏;自然界中一些微生物可进行化能合成作用,如硝化细菌,能以无机氮源合成自身物质,同时通过氧化外界无机物获得生长所需能量;无机物也可提供碳源和氮源,如碳酸盐和硝酸盐等。 5. C 【解析】 培养基冷却到50 ℃左右即可倒平板。
6. D 【解析】 制备培养基灭菌时,培养基应该先调节pH后灭菌,A正确;培养基在分装到培养皿之前要先进行灭菌处理,以防止杂菌的污染,B正确;溶化琼脂时要用玻璃棒搅拌,防止琼脂烧焦,搅拌的过程不能让琼脂溢出,C正确;高压蒸汽灭菌锅加盖时要以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,而不是依次旋紧,D错误。
7. B 【解析】 平板划线法和稀释涂布平板法纯化培养大肠杆菌都需要用固体培养基,在火焰旁进行接种,防止杂菌污染;平板划线法需要使用接种针进行接种,只能分离微生物,不能计数;稀释涂布平板法需要用涂布器接种,可根据菌落数来计数活菌。 8. D 【解析】 在分离、纯化大肠杆菌实验中,接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌;连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落;接种过程中,接种前要灼烧,每次划线后均需灼烧,至少需要对接种环灼烧5次;据甲和乙对比,甲中d区域为划线的起始位置。 9. D 【解析】 微生物培养前,需对培养基和培养皿进行灭菌处理。 10. D 【解析】 蛋白胨可以提供碳源与氮源;配制培养基时可添加适宜种类和浓度的抗生素以防止细菌污染;将不同来源的菌株接种到培养液后置于-20 ℃条件下冷冻保存56 d,可以筛选出耐冻性面包酵母菌菌种;只有稀释涂布平板法可以测定活菌数。 11. BCD 【解析】 早期胚胎的培养液中添加维生素是为了提供营养,加入抗生素能防止杂菌污染;青霉素可以抑制细菌、放线菌的生长从而防止杂菌污染;腐乳装瓶腌制时在近瓶口处加大用盐量及在酒精灯火焰旁倒平板都能防止空气中的杂菌污染。
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12. ABC 【解析】 平板划线法接种时在每次划线前都需要将接种环进行灭菌,杀死残留的菌种以确保每次划线的菌种均来自上次划线的末端,以达到稀释的目的,注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 13. BCD 【解析】 培养基中加入纤维素起到了选择培养的作用,培养基中加入的刚果红染液又对纤维素分解菌进行鉴别,A正确;刚果红可以与纤维素形成红色复合物,当纤维素被纤维素酶分解后,红色复合物无法形成,B错误;涂布平板时,将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后,冷却810 s再用,不能沾少量菌液,C错误;应只选择平板中有较大透明圈的菌落进行纯化培养,D错误。
14. (1) 影响蒸汽流通 达不到规定温度 皿底 (2) ⑤ (3) 稀释涂布平板 大小、质地相同 (4) 见下图
【解析】 (1) 高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌时,装有培养基的灭菌包装入时不能装得太挤,否则会因影响蒸汽流通而影响灭菌的效果。加热初期必须将灭菌锅内的冷空气排尽,否则会因达不到规定温度而影响灭菌效果。培养基的种类、培养日期、平板上样品的稀释度、培养微生物名称及制作者姓名等信息要用记号笔在皿底上标明。(2) 由图1可以看出,浓度为⑤的麦迪霉素浸泡后的圆纸片周围透明圈最大,对大肠杆菌抑制作用最明显。(3) 该实验用稀释涂布平板法进行接种。为了避免无关变量对实验结果的影响,圆纸片的大小、质地要相同。(4) 研究相同浓度的三种不同抗生素A、B、C对大肠杆菌生长的影响,可以将一组相同圆纸片分别放入等量的无菌水、抗生素A、B、C溶液中浸泡后,放在接种有大肠杆菌的培养基上。
15. (1) ② (2) 缺氮 (3) 培养基表面的菌悬液会出现积液,导致菌体堆积,影响分离效果
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(4) 菌落 (5) ① 让固氮菌与培养液充分接触 ② 抽样检测 2.8×10 对培养液稀释后计数 ③ 丙 【解析】 (1) 在配制含琼脂的培养基时需要将培养基分装到锥形瓶中用棉塞塞住瓶口,再用高压蒸汽灭菌锅灭菌。倒平板时,为了防止杂菌污染需要在酒精灯旁操作。接种环在进行平板划线时会用到。(2) 因为自生固氮菌能够独立进行固氮,所以用缺氮培养基可以筛选分离自生固氮菌。(3) 为了防止培养基表面的菌悬液出现积液,导致菌体堆积,影响分离效果,在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌液量不宜过多。(4) 由于不同种类的细菌形成的菌落特征不同,故可以通过菌落的形态特征来统计土壤中自生固氮菌的种类。(5) ① 为了让固氮菌与培养液充分接触,培养过程中需要不断振荡。② 对固氮菌进行计数可以采用抽样检测法。
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每个计数室的容积为0.1 mm,有400个小方格。若每个小方格中平均有7个固氮菌,则计数
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室内固氮菌为2 800个。10 mL培养液中固氮菌的数量为10×2 800×10=2.8×10个。若小方格中固氮菌的数量太多,无法数清,可以稀释后再计数。③ 由表中结果可知,丙菌菌量少而含氮量高,所以丙菌的固氮效率最高。
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江苏省盐城市2024届高三生物一轮复习第十三单元生物技术第2讲微生物的实验室培养作业苏教版
