竹荪多糖的抑菌活性研究

竹荪多糖的抑菌活性研究

王宪伟 (武警工程大学，陕西西安710086)

【摘 要】摘要 ［目的］为竹荪的开发利用提供理论依据。［方法］采用DEAE－纤维素柱层析法分离纯化竹荪多糖，用抑菌圈法测定竹荪多糖的抑菌效果，研究竹荪多糖的体外抑菌活性。［结果］将含有竹荪多糖的纸片置于涂布黑曲霉、草酸青霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的平板上，均出现抑菌圈，且真菌的抑菌圈直径大于细菌的抑菌圈直径;竹荪多糖对5种菌的最小抑菌浓度分别为2.50、2.50、5.00、5.00、2.50 mg/ml。［结论］竹荪多糖对黑曲霉、草酸青霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定的抑制作用，且对真菌的抑制作用强于细菌。 【期刊名称】安徽农业科学 【年(卷),期】2013(041)004 【总页数】2

【关键词】关键词 竹荪;多糖;抑菌活性

竹荪，是竹荪属(Dictyophora)的总称，为当今世界上名贵的大型食用菌之一［1］。竹荪含有氨基酸、多糖、维生素及微量元素等生物活性物质，具有健脾益胃、降血脂、降血压、抗肿瘤、抗凝血、抗炎症、抗辐射等保健作用［2］。其中，野生竹荪香味浓郁、味道鲜美、质地爽口，有“菌中皇后”的美称［3］。有研究表明，红托竹荪菌托多糖对小鼠S180肉瘤有一定的抑制作用［4］;竹荪提取液对食品中主要致病细菌均有较低的最低抑菌浓度和杀菌浓度［5］。笔者研究了竹荪多糖的生理活性，以期了解其各种功效及机理。

1 材料与方法

1.1 材料 供试竹荪购自当地市场，食用级。牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉 20 g，蒸馏水1 000 ml;土豆汁培养基:马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂粉20 g，蒸馏水1 000 ml。供试菌种有黑曲霉(Aspergillus niger)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。其他试剂均为分析纯。 1.2 方法

1.2.1 竹荪多糖的制备。将竹荪烘干、粉碎、过60目筛，然后用浓度75%乙醇脱脂，热水浸提，Seveg法脱蛋白，经DEAE－52层析柱分离纯化，得到竹荪多糖。多糖含量的测定采用苯酚－硫酸法［6］。

1.2.2 培养基及滤纸片的制备。按照文献［7］方法配制牛肉膏蛋白胨和土豆汁固体培养基，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌。在无菌环境下，向灭菌培养皿和试管中倒入适量培养基，待其凝固，备用。定性滤纸用打孔器打成直径为6 mm圆形滤纸片，置于干净的培养皿中灭菌。

1.2.3 供试菌种菌悬液的制备。将供试菌种分别接入相应的斜面培养基上活化，放入恒温培养箱中培养。真菌在25℃条件下培养72 h;细菌在37℃条件下培养24 h。挑取适量的菌落，用无菌水进行梯度稀释，采用血球板计数，制成浓度为107～108cfu/ml的菌悬液。

1.2.4 竹荪多糖的抑菌作用。将竹荪多糖配成浓度为10 mg/ml的溶液。采用滤纸片扩散法，将6 mm圆形滤纸片分别放入多糖溶液和无菌水中，浸泡1 h，使其充分吸收［8］。移取0.5 ml菌悬液于倒好平板的培养皿中，用玻璃棒涂布均匀。用无菌镊子夹取浸泡过的滤纸片3片，贴在含菌平板上，滤纸片中间间

隔一定距离。同时，用无菌水浸泡过的滤纸片做对照，3次重复。将平皿倒置于恒温培养箱中，真菌在28℃条件下培养72 h，细菌在37℃条件下培养24 h。取出，测量抑菌圈直径。

1.2.5 最小抑制浓度(MIC)的测定。采用二倍稀释法，将竹荪多糖液稀释成浓度为 1.25、2.50、5.00、10.00 mg/ml的系列梯度浓度。在无菌条件下，将已灭菌的滤纸片放入多糖溶液中，浸泡1 h，备用。按照试验操作，用无菌水浸泡过的滤纸片作为对照，3次重复。倒置于恒温培养箱中培养，测量抑菌圈直径。出现抑菌圈的最低浓度即为最小抑菌浓度［9］。

2 结果与分析

2.1 竹荪多糖的制备 采用DEAE-52对竹荪多糖进行分离纯化，在用蒸馏水做洗脱剂时得到单一对称峰(图1)，收集16～25管洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到竹荪多糖。

2.2 竹荪多糖的抑菌活性 由表1可知，竹荪多糖对5种供试菌都有显著的抑制效果。它对真菌的抑制作用比细菌强;真菌中，它对黑曲霉的抑制作用强于草酸青霉;它对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌3种细菌的抑菌圈直径相差不大，抑菌作用相当。

2.3 最小抑菌浓度 最小抑菌浓度越小，其抑菌能力就越强。由表2可知，竹荪多糖对黑曲霉、草酸青霉和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均为2.50 mg/ml，对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度为5.00 mg/ml，表明竹荪多糖对黑曲霉、草酸青霉和金黄色葡萄球菌的抑制作用较强。

3 结论

多糖对各类微生物的生长均有不同程度的抑制作用［10－11］。选取食品中常