實 習 項 目 實 習 內 容 第一梯次: 蛋白質體學與生物資訊 取293細胞(2 × 107)，經42oC熱處理2小細胞觀察、蛋白樣品定量及迷你電泳時、37oC恢復3小時後，抽取細胞液蛋白，分析細胞液 定量後以迷你電泳分析細胞液(包括染色、 乾片、轉漬等)。 一維等電點聚焦(IEF)及二維利用一維等電點聚焦、二維SDS-PAGE電SDS-PAGE電泳 泳技術，分離細胞液之蛋白質。
Coomassie blue染劑染色、2D膠片影電泳結束後，以Coomassie blue染劑染色，像擷取及分析 擷取2D膠片影像，並以軟體分析熱處理前 後之蛋白差異表現。 蛋白點擷取及In gel digestion 擷取差異表現之蛋白點，以trypsin進行In gel digestion。 西方轉漬分析 藉西方轉漬分析檢測熱處理有差異表現之HSP70、HSP40蛋白。 蛋白質資料庫、蛋白質身分鑑定及蛋 於電腦教室教授蛋白質資料庫、蛋白質身白質交互作用、蛋白質網路及路徑軟分鑑定及蛋白質交互作用、蛋白質網路及體介紹及操作 路徑軟體 第二梯次: 基因轉殖動物 利用PCR技術把目標DNA 純化，並藉由轉殖DNA製作 細菌的轉殖技術把該DNA片段放入適當含 螢光蛋白表現之載體當中。 斑馬魚受精卵顯微注射 藉由斑馬魚受精卵顯微注射方式，將欲研 究之DNA注射入斑馬魚的胚胎初期，再配 合螢光蛋白的表現結果，研究特定基因之 調控。 11
轉殖斑馬魚基因表現觀察 斑馬魚切片染色及組織觀察 轉殖斑馬魚行為觀察 利用螢光顯微鏡觀察轉殖個體中，轉殖基因之綠螢光蛋白(GFP)表現。 將幼魚以及成魚之組織，進行冷凍切片，並利用適當的染色法，透過光學顯微鏡觀察其組織切片形態。 藉由各類型的行為測試，包括移動活性、主動迴避、驚嚇反應等，觀察經過轉殖的動物在各類的行為表現上與一般也野生型動物是否有差異。 第三梯次: miRNA分析及RNA干擾 技術 先利用stem-loop miRNA RT引子將欲研究miRNA分析 的目標miRNA和內部控制基因RNU48在 PCR上進行反轉錄反應，再將合成的cDNA 模板利用TaqMan探針螢光化學原理進行 同步定量PCR之偵測，以了解目標miRNA 表現量高低。 雙股RNA 製備 利用PCR技術把T7 RNA聚合酵素啟動子 接在水母綠螢光基因的DNA片段兩端。此 PCR增殖DNA片段經電泳分離、膠體純化 後，在試管中加入T7 RNA聚合酵素，以 in vitro transcription方式，製備雙股RNA， 以基因槍將雙股RNA轉殖入果蠅受並純化及定量。 精卵 將純化的雙股RNA包覆於金微粒上。收集 表現水母綠螢光基因的果蠅受精卵，去蛋 殼並以細刷毛筆及膠水將果蠅受精卵塗佈 在Petri dish或玻片上，於通風處輕微脫 12
顯微觀察/記錄RNAi效果 水。以基因槍轟擊果蠅受精卵，後立即覆蓋上Halocarbon oil，置於18 -25 ℃培養箱中培養12-16小時。 以螢光顯微鏡觀察比較控制組及經轟擊過的果蠅胚胎，其水母綠螢光基因表現的差異，並照相紀錄。 13
教育部顧問室97年度生物及醫學科技人才培育先導型計畫
「暑期中小學教師生物技術研習班及課程」報名表
姓名： 服務學校： 服務學校郵遞區號及住址： □□□ 服務學校電話及傳真： (電話) (傳真) 個人通訊電話及電子郵件信箱： (電話/手機) (電子郵件信箱) 性別： 身分證字號： 14
我願意參加的班別(請勾選)： A. 研習班 生物技術基礎班： ? 第一梯次：民國97年6月27日(週五) ～ 7月 1日(週二)。 ? 第二梯次：民國97年7月 2日(週三) ～ 7月 6日(週日)。 生物技術進階班： ? 第一梯次：民國97年7月12日(週六) ～ 7月16日(週三)。 ? 第二梯次：民國97年7月18日(週五) ～ 7月22日(週二)。 ? 第三梯次：民國97年7月24日(週四) ～ 7月28日(週一)。 B. 生技課程 ? 生物技術（3學分） ? 生物技術特論（3學分） ? 生物技術概論（2學分） ? 生物技術實驗（2學分） ? 我已郵政劃撥繳費。 中
華
民
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教育部顾问室97年度生物及医学科技人才培育先导型计画
