绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠nephrin、VEGF表达及
肾功能的影响
王雁秋1黄 平2邓 旻1
【摘 要】目的 观察绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病（DN）大鼠nephrin、VEGF表达的影响，探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的作用机制。方法 采用单侧肾切除加链脲佐菌素注射法改良复制大鼠DN模型，实验分为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组和缬沙坦组，每组8只。药物干预4周后测定24h尿蛋白、内生肌酐清除率、足细胞相关分子nephrin及足细胞分泌的VEGF蛋白在肾脏组织的表达。结果 绞股蓝总皂苷高剂量组24h尿蛋白明显低于模型组［（77.04±16.63）mg比（110.56±46.88）mg，P＜0.05］，内生肌酐清除率高于模型组［（1.47±0.24）mL·min-1比（1.25±0.23）mL·min-1，P＜0.05］。高剂量组 nephrin 蛋白表达水平较模型组明显上调（0.4250±0.02 比 0.3388±0.02，P＜0.01），VEGF 表达明显抑制（0.2588±0.03 比 0.3521±0.01，P＜0.01），且效果类似缬沙坦组。结论 绞股蓝总皂苷能降低DN大鼠尿蛋白，改善肾功能和足细胞相关蛋白的异常表达。 【期刊名称】浙江中西医结合杂志 【年(卷),期】2015(000)001 【总页数】4
【关键词】大鼠；糖尿病肾病；足细胞；绞股蓝总皂苷；nephrin；VEGF 糖尿病肾病（DN）是终末期肾衰竭的常见原因，目前确切的发病机制尚未阐明。足细胞是维持肾小球滤过膜最后屏障与结构的主要细胞。足细胞损伤在DN进展中发挥重要作用。本实验在前期研究的基础上通过检测实验大鼠肾功能、
24h尿蛋白及足细胞nephrin、VEGF蛋白的表达，观察绞股蓝总皂苷对早期糖尿病肾病的影响，进一步探讨相关作用机制。
1 实验材料
1.1 动 物 健康SPF级SD雄性大鼠60只，体质量200～240g，浙江中医药大学实验动物中心提供并饲养,动物合格证号：SYXK（浙）2008-0115。
1.2 试 剂 绞股蓝总苷片（安康正大制药有限公司，国药准字：Z10970130）；缬沙坦胶囊（北京诺华制药有限公司，国药准字：H20040217）；链脲佐菌素STZ（美国Sigma公司）；即用型鼠SP检测试剂盒（SP-9002）、即用型兔 SP检测试剂盒（SP-9001）（北京中杉金桥生物技术有限公司）
2 实验方法
2.1 DN模型制作及分组 模型复制参照杨俊伟等[1]单侧肾切除加STZ注射法。成模标准[2]为血糖＞16.7mmol/L，尿量＞对照组的50%，24h尿蛋白＞对照组的50%。随机将成模大鼠分为5组，每组8只：即绞股蓝总皂苷高剂量组（1g/kg）、绞股蓝总皂苷中剂量组（0.5g/kg）、绞股蓝总皂苷低剂量组（0.25g/kg）、缬沙坦（8mg/kg）、模型组（予等体积生理盐水灌胃）。正常对照组为8只正常大鼠（予等体积生理盐水灌胃）。大鼠血糖升高1周后（第8天）开始固定时间空腹灌胃给药，1天1次，干预时间持续4周。实验期间大鼠自由饮水和摄食。
2.2 大鼠血、尿检测 各组大鼠均于治疗前及治疗28天后提前一天以代谢笼留取24h尿液标本测定24h尿蛋白、尿肌酐；治疗28天后腹腔麻醉，空腹取静脉血测定血肌酐、尿素氮。
2.3 免疫组化测定nephrin、VEGF表达及半定量分析 nephrin采用即用型兔
检测试剂盒（SP-9001），VEGF采用鼠SP检测试剂盒（SP-9002）：肾组织经脱蜡水化，PBS冲洗后浸入枸橼酸盐缓冲液抗原修复，按照说明书要求滴加一抗原，次日PBS冲洗后DAB显色，苏木素核复染，中性树胶封片。以肾小球内棕黄色颗粒且染色强度高于背景者为阳性表达，阴性不显色。每例标本随机选取10个不重叠肾小球视野（×400），分别检测肾小球内阳性表达信号的平均光密度和面积，用Image-pro-plus6.0软件进行半定量分析。
2.4 统计学方法 实验数据用（±s） 表示，多组间若方差齐，采用单因素方差分析（One-way ANOVA），组间差异采用LSD检验方法。若方差不齐采用q检验。应用SPSS17.0软件进行统计分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。
3 实验结果
3.1 24h尿蛋白比较 药物干预4周后，绞股蓝总皂苷中、高剂量组，缬沙坦组大鼠24h尿蛋白较治疗前下降（P＜0.05），且均低于模型组（P＜0.05）。绞股蓝总皂苷低剂量组大鼠尿蛋白较前增多，与模型组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。
3.2 肾功能指标比较 各组大鼠内生肌酐清除率较正常对照组明显下降（P＜0.05），绞股蓝总皂苷低剂量组、模型组两组之间无差异（P＞0.05），绞股蓝总皂苷高、中剂量组和缬沙坦组明显高于模型组（P＜0.05），见表2。 3.3 肾脏nephrin、VEGF蛋白表达比较 nephrin表达：正常对照组可见nephrin连续、线性分布在肾小球毛细血管畔足细胞侧，且表达较强（图1，插页）；模型组上述阳性表达明显减弱，且分散不均一（P＜0.01）（图 2，插页）；各治疗组 nephrin表达较模型组表达均上调（P均＜0.01）（图 3～6，插页），见表 3。VEGF表达：正常对照组大鼠肾小球及肾小管均未见或少见
绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠nephrin、VEGF表达及肾功能的影响
