基于NF-κB表达探讨人参皂苷Rd对冈田酸诱导的神经细胞损伤的保护作用

基于NF-κB表达探讨人参皂苷Rd对冈田酸诱导的神经细

胞损伤的保护作用

李 玲

【摘 要】[摘要] 目的 探讨人参皂苷Rd对冈田酸诱导的神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法 胎鼠海马细胞体外实验：①实验分为8组。正常组胎鼠海马细胞不加其他处理因素正常培养，对照组加入ddH2O培养，冈田酸2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h组分别加入10 nmol/L冈田酸进行培养，通过细胞免疫荧光化学染色观察各组海马神经元细胞形态。②实验分为5组。正常组不加其他处理因素正常培养，对照组加入ddH2O培养，冈田酸组加入10 nmol/L冈田酸培养，均培养12 h；人参皂苷Rd 2.5 μmol/L组、人参皂苷Rd 5 μmol/L组先加入相应浓度的人参皂苷Rd预处理12 h，再加入10 nmol/L冈田酸培养12 h。各组培养12 h后，采用Western blot方法检测海马神经元内NF-κB表达情况。SD雄性大鼠体内实验：将75只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、冈田酸1周组、冈田酸2周组、冈田酸2周+人参皂苷Rd组，每组15只。除正常组和假手术组外，其余组均进行冈田酸溶液左右侧脑室区注入造模；冈田酸2周+人参皂苷Rd组每天相同时间段腹腔注射人参皂苷Rd 10 mg/kg 1次，连续21 d，期间于第8天进行冈田酸造模。冈田酸1周组、冈田酸2周组大鼠分别于造模后1周、2周处死，其他组大鼠均于实验第21天给药完毕后处死。采用Western blot方法检测皮质和海马中NF-κB表达情况。结果 细胞免疫荧光染色显示冈田酸各组海马神经元进行性损伤，时间越长，损伤越严重。冈田酸组海马神经元细胞中NF-κB表达水平明显高于正常组和对照组(P均<0.05)，人参皂苷Rd 2.5 μmol/L组、人参皂苷Rd 5 μmol/L组明

显低于冈田酸组。 冈田酸 1 周组、冈田酸2 周组大鼠皮质和海马区NF-κB表达水平均明显高于正常组和假手术组(P均<0.05)。冈田酸2周+人参皂苷Rd组大鼠皮质和海马区NF-κB表达水平均明显低于冈田酸 1 周组和冈田酸2 周组(P均<0.05)。结论 人参皂苷Rd能抑制冈田酸诱导的海马神经元及海马CA1区注射冈田酸大鼠皮质和海马内NF-κB表达，从而减轻神经元损伤，具有神经保护作用。

【期刊名称】《现代中西医结合杂志》 【年(卷),期】2019(028)036 【总页数】5

【关键词】[关键词] 人参皂苷Rd;冈田酸;阿尔茨海默病;NF-κB

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是由多种因素引起的神经功能异常而导致的一种以记忆障碍和认知功能障碍为特征的渐进性神经变性疾病[1]，多发于老年人。AD的病因主要有遗传性、散发性，大多数属于散发性，主要是由载脂蛋白E(ApoE)和环境因素及各种慢性疾病(糖尿病、高同型半胱氨酸血症等)相互作用引起[2]。目前研究认为细胞外β淀粉样蛋白(Aβ)沉积、tau蛋白过度磷酸化、氧化应激、炎症反应与AD的发生发展密切相关，其中Aβ沉积是AD发生和发展的首要及中心环节，Aβ沉积会导致神经元减少及功能障碍，从而发展成痴呆[3-4]。海马是大脑中参与学习与记忆的重要器官，而AD患者以海马的病理改变最为突出[5]。目前针对AD的药物治疗均属对症治疗，能影响或逆转病程进展的药物还在研究阶段。人参皂苷Rd是中药人参的有效成分，其可通过抗炎、抗氧化、抗凋亡及抑制钙离子内流作用而发挥神经保护作用[6-7]。本实验主要通过冈田酸干预的海马神经元细胞模型和海马CA1区注射冈田

酸的大鼠模型，探讨了人参皂苷Rd对NF-κB的调控发挥其保护神经元作用的可能机制。

1 实验资料

1.1 实验动物 健康清洁级Sprague-Dawley (SD)妊娠大鼠1只，孕期(18±2)d，由空军军医大学动物中心提供。健康清洁级Sprague-Dawley(SD)成年雄性大鼠75只，体质量(200±10)g，由空军军医大学实验动物中心提供，动物合格证编号：SCXK(陕)2014-002。动物饲养在空军军医大学动物实验室,饲养条件符合国家科学技术委员会的《实验动物管理条例》，湿度控制在45%～60%，温度保持20～30 ℃，明暗比为1∶1。

1.2 药物与试剂 人参皂苷Rd由广州泰禾制药公司提供，纯度>98%。DMEM-F12培养基、左旋多聚赖氨酸和Neurobasl添加剂均购自Gibco公司。胎牛血清购杭州江滨生物技术有限公司。βⅢtubulin单克隆抗体购自Millipore公司。冈田酸购自Sigma公司。兔抗NF-κB p65购于 Millipore公司。 1.3 主要仪器 CO2培养箱(美国Forma Scientific公司)，倒置显微镜(日本Olympus，CK40)。

1.4 实验方法 实验均经医学实验动物管理委员会批准。

1.4.1 体外实验 ①实验分为正常组、对照组及冈田酸2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h组。在无菌条件下取出胎鼠，解剖分离出海马，分散细胞，以细胞数约2×105 mL-1的密度和Neurobasl直接接种在预先用多聚赖氨酸包被96孔板中，每孔培养基体积200 μL，放入37 ℃、5%CO2细胞培养箱中培养，以后每3 d半量换液1次。正常组细胞不加其他处理因素正常培养，对照组加入ddH2O培养，冈田酸各组分别加入10 nmol/L冈田酸进行培养。然后在相应