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食用菌母种制作实验一

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实验一 食用菌母种制作

一、目的要求:

1、了解母种培养基制作过程,理解灭菌原理; 2、掌握母种培养基的制备方法;

3、了解无菌操作基本原理,掌握母种的无菌接种培养方法。 4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤; 5、熟练分离出栽培用菌种。

二、主要仪器设备及药品材料:

灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管(18x180mm)、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。

三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 PDA培养基配方

马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升. 2. 母种培养基的配制

(1)熬制。马铃薯洗净,挖芽去皮。称取200克,切成玉米大小颗粒或薄片。量筒量取1000毫升水,铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热,加入葡萄糖和琼脂,不断搅拌,直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。

(2)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长度的1/5左右,注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后,盖紧硅胶塞。

(3)捆把。7支试管为一捆,用牛皮纸包裹试管口,用捆扎绳扎紧。贴上标签,准备灭菌。

(4)灭菌。注意加足水量和排气,灭菌完成后降压不能太快。 (5)摆斜面,培养基长度约为试管长度的1/2。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布,防止试管内产生过多的冷凝水。

①菌种分离与培养

(1)种菇选择。选取无杂菌感染,无病虫害,出菇均匀,适应性强的子实体,要求个体健壮,朵大肉厚,外形规整,出菇早,约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄,放入干净器皿内备用。

(2)母种分离(组织分离法)。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒,在超净工作台内将子实体撕开,用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块(绿豆大小)移至试管斜面培养基的适当位置,迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室内避光培养7-8天,检查菌丝生长情况。

四、实验结果

每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。

五、作业

1.食用菌菌种分离有哪些方法?实际生产中最常用的方法是哪一种?该方法有何优点?

2.组织分离法制作母种成功的关键是什么?在操作中如何避免母种制作失败?

实验二 食用及药用菌原种制作技术

目的要求:

1、了解原种培养基的配制原理及过程; 2、掌握玉米粒原种的制作方法。

重点与难点:

重点: 母种培养基制作过程; 无菌操作; 食用菌组织分离法制作菌种. 难点: 食用菌组织分离法制作菌种.

教学方法与手段:

本次课主要采取讲授法和讨论法,在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。

实验内容:

1、按比例计算、称取各组分; 2、添加、混合均匀各组分; 3、培养料水分、pH调节、装袋; 4、原种培养基灭菌; 5、转接、培养原种。 6、原种质量检查

主要仪器设备药品材料:

灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。

实验步骤

一. 原种培养基的制备

1. 选定配方。玉米97%,碳酸钙2%,石膏粉1%,PH6.5-7.0。 2. 培养基配制。选择无病虫害的的玉米粒,用清水冲洗干净,浸泡40小时左右。加水超过玉米粒表面,煮开锅后,小火再煮5-30分钟,使玉米粒充分煮透(胀而不破,切开后无白心)。用清水冲洗冷却,淋去谷粒表面水份。加入碳酸钙和石膏粉,充分搅拌均匀备用。

3. 装瓶封口。将配制好的培养基装入原种瓶中。将玉米粒培养基装至低于瓶肩处。做到培养基均匀一致,松紧适度,料面平整,擦净瓶口内外壁。塞上棉塞,外面用一层牛皮纸包好。

4. 灭菌。分装好的原种瓶在当天灭菌,避免培养基发霉变质。采用高压蒸汽灭菌。灭菌压力1.4-1.5Kg/cm2。灭菌时间为1.5-2小时。冷却至30℃以下待用。

二. 接种

1. 超净工作台消毒灭菌。将灭菌后的原种瓶及接种用的所有用具(酒精灯,接种铲等)放入接种场所,进行消毒灭菌。

2. 接种。将平菇母种试管外壁表面消毒后放入超净工作台中。点燃酒精灯,用酒精棉球再次对试管外壁表面消毒,特别是管口处,去下棉塞后,试管口在火焰上烤一下,然后用经火焰灭菌并已冰凉的接种铲将母种斜面分成4-6份,将其固定在接种架上,注意管口始终在酒精灯火焰形成的无菌区内(管口离火焰1-2厘米)。然后左手持原种瓶,右手取下棉塞,瓶口在火焰上烤一下,用接种铲取一份母种迅速准确的放入料瓶内的接种穴处,棉塞过火后塞好,包上包头纸。如此反复,每支母种可扩接原种4-6瓶。

三. 培养。

将接种后的原种瓶放入消毒过的培养室培养,培养温度为25℃。定期检查杂菌发生情况,从培养3-5天开始每天检查一次,当菌丝封住料面并向下深入1-2厘米时,可改为每周检查一次,发现污染的瓶立即淘汰,并隔离污染源。 四. 原种质量检查

无论麦粒原种还是棉籽壳原种,接种后在25℃左右培养20-40天,菌种即可长满瓶。品质优良的原种,菌丝洁白、纯净、有食用菌特有的香味。若出现黄、绿、黑等颜色的毛状物或菌瓶内有酸臭味道。不能使用,应将其灭菌后远离培养场地处深埋。

作业

1. 食用菌原种培养基主要有哪些? 2. 制作原种过程中应该注意哪些问题?

实验三 食用及药用菌栽培种制作技术

目的要求:

1、了解栽培种培养基的配制原理及过程; 2、理解好的栽培种培养基对生产的重要性; 3、掌握水在配料中的作用; 4、掌握栽培种制作技术。

重点与难点:

重点: 栽培种培养基的配制原理及过程; 栽培种制作技术. 难点: 水份含量的掌握.

教学方法与手段:

本次课主要采取讲授法和讨论法,在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。

实验内容:

食用菌母种制作实验一

实验一食用菌母种制作一、目的要求:1、了解母种培养基制作过程,理解灭菌原理;2、掌握母种培养基的制备方法;3、了解无菌操作基本原理,掌握母种的无菌接种培养方法。4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤;5、熟练分离出栽培用菌种。二、主要仪器设备及药品材料:灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、
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