1 绪论
1．生物化学研究的对象和内容是什么 解答 ：生物化学主要研究 :
（1）生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能； （2）生物分子分解与合成及反应过程中的能量变化； （3）生物遗传信息的储存、传递和表达； （4）生物体新陈代谢的调节与控制。
2．你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。 提示：生物化学是生命科学的基础学科，注意从不同的角度，去理解并运用生物化学的知识。 3．说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。
解答：生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、硫等 6 种是蛋白质、核酸、糖和 脂的主要组成元素。碳原子具有特殊的成键性质，即碳原子最外层的 4 个电子可使碳与自身形成共价单键、共 价双键和共价三键， 碳还可与氮、 氧和氢原子形成共价键。 碳与被键合原子形成 4个共价键的性质 , 使得碳骨架 可形成线性、分支以及环状的多种多性的化合物。特殊的成键性质适应了生物大分子多样性的需要。氮、氧、 硫、磷兀素构成了生物分子碳骨架上的氨基（一
NH）、羟基（一0H、羰基（）、羧基（一COOH、巯基（一SH、
磷酸基（— PO4 ）等功能基团。这些功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及氮和氧有着较强的电负性而与 生命物质的许多关键作用密切相关。
生物大分子在结构上也有着共同的规律性。生物大分子均由相同类型的构件通过一定的共价键聚合成 链状，其主
链骨架呈现周期性重复。 构成蛋白质的构件是 20 种基本氨基酸。 氨基酸之间通过肽键相连。 肽链具 有方向性（N端T C端），蛋白质主链骨架呈“肽单位”重复；核酸的构件是核苷酸 二酯键相连，核酸链也具有方向性
,核苷酸通过3 ' , 5'-磷酸
（5 '、T 3'）,核酸的主链骨架呈“磷酸-核糖（或脱氧核糖）”重复；构成
脂质的构件是甘油、脂肪酸和胆碱，其非极性烃长链也是一种重复结构；构成多糖的构件是单糖，单糖间通过 糖苷键相
连，淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。
2 蛋白质化学
1用于测定蛋白质多肽链 N端、C端的常用方法有哪些基本原理是什么 解答：（1） N-末端测定法：常采用一二硝基氟苯法、
Edman降解法、丹磺酰氯法。
① 一二硝基氟苯（DNFB或FDNB迭：多肽或蛋白质的游离末端氨基与一二硝基氟苯 （—DNFB反应（San ger 反应），生成DNP—多肽或DNP—蛋白质。由于DNFB与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此 DNP—多肽经 酸水解后，只有 N—末端氨基酸为黄色 DNF3-氨基酸衍生物，其余的都是游离氨基酸。
② 丹磺酰氯（DNS）法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯 （DNS-Cl ）反应生成DNS-多肽或DN— 蛋白质。由于DNS与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定， 强烈的荧光物质DNS~氨基酸，其余的都是游离氨基酸。
③ 苯异硫氰酸脂（PITC或Edman降解）法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯（ （Edman反应），生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。 的PTC-氨基酸发生环化，
生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来，除去
N-末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。
N 端逐个地向里切。根据不同的反应
N端
PITC）反应
因此DNS-多肽经酸水解后，只有N—末端氨基酸为
在酸性有机溶剂中加热时， N—末端
④ 氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的
时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的 残基序列。
（2） C —末端测定法：常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。 肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除 在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。 ② 还原法：肽链 C端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的 端氨基酸的a—氨基醇，可用层析法加以鉴别。
③ 羧肽酶法：是一类肽链外切酶，专一的从肽链的
a—氨基醇。肽链完全水解后，代表原来 C端氨基酸以游离形式存
C—末
C—末端开始逐个降解，释放出游离的氨基酸。被释放
的氨基酸数目与种类随反应时间的而变化。根据释放的氨基酸量（摩尔数）与反应时间的关系，便可以知道该 肽链的C—末端氨基酸序列。
2．测得一种血红蛋白含铁 %，计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量计算含亮氨酸 其最低相对分子质量是多少
解答：
（ 1）血红蛋白：
%和异亮氨酸 %，问
（ 2）酶：
因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等，所以亮氨酸和异亮氨酸的残基数之比为： 该酶分子中至少含有 2 个亮氨酸， 3 个异亮氨酸。
%:%=2:3，因此，
3．指出下面 pH 条件下，各蛋白质在电场中向哪个方向移动，即正极，负极，还是保持原点 ( 1)胃蛋白酶( pI )，在 pH ； (2) 血清清蛋白( pI )，在 pH ； (3) a -脂蛋白(pl )，在pH和pH ;
解答：(1)胃蛋白酶pl V环境pH，带负电荷，向正极移动； (2) 血清清蛋白pl V环境pH，带负电荷，向正极移动； (3) a -脂蛋白pl ＞环境pH，带正电荷，向负极移动；
a -脂蛋白pl V环境pH，带负电荷，向正极移动。
4．何谓蛋白质的变性与沉淀二者在本质上有何区别 解答：蛋白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后，使其失去原有的生物活性，并伴随着 物理化学性质的改变，这种作用称为蛋白质的变性。
变性的本质：分子中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态，一级结构不 破坏。
蛋白质变性后的表现：① ？生物学活性消失； 收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。
蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂，破 坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀机理：破坏蛋白 质的水化膜，中和表面的净电荷。
蛋白质的沉淀可以分为两类：
(1) 可逆的沉淀：蛋白质的结构未发生显著的变化，除去引起沉淀的因素，蛋白质仍能溶于原来的溶剂 中，并保持
天然性质。如盐析或低温下的乙醇(或丙酮)短时间作用蛋白质。
(2) 不可逆沉淀：蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质变性而沉淀，不再能溶于原溶剂。如加热 引起蛋白质
沉淀，与重金属或某些酸类的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在，并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉 淀，而沉淀的蛋白质也未必都已经变性。
5.
酯，丹磺酰氯，脲，
下列试剂和酶常用于蛋白质化学的研究中： CNBr,异硫氰酸苯6mol/L HCI卩-巯
②？理化性质改变：溶解度下降，黏度增加，紫外吸
基乙醇，水合茚三酮，过甲酸，胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，其中哪一个最适合完成以下各项任务
( 1 )测定小肽的氨基酸序列。 ( 2)鉴定肽的氨基末端残基。
( 3)不含二硫键的蛋白质的可逆变性。若有二硫键存在时还需加什么试剂
( 4)在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。 （5）在甲硫氨酸残基羧基侧水解肽键。 （6）在赖氨酸和精氨酸残基侧水解肽键。
解答：（1）异硫氰酸苯酯；（2）丹黄酰氯；（3）脲；-巯基乙醇还原二硫键；（4）胰凝乳蛋白酶；（5） CNB; （ 6）胰蛋白酶。
6．由下列信息求八肽的序列。
（1） 酸水解得 Ala ， Ar g ， Leu， Met， Phe， Thr ，2Val 。 （ 2） Sanger 试剂处理得 DNP-Ala。
（3） 胰蛋白酶处理得 Ala，Arg，Thr 和 Leu ，Met，Phe，2Val 。当以 Sanger 试剂处理时分别得到 DNP-Ala 和
DNP-Val。
（4） 溴化氰处理得 Ala，Arg,高丝氨酸内酯，Thr，2Val，和Leu，Phe,当用Sanger试剂处理时，分 别得 DNP-Ala 和 DNP-Leu。
解答：由（2）推出N末端为Ala ;由（3）推出Vai位于N端第四，Arg为第三，而Thr为第二；溴化氰 裂解，得出 N端第六位是 Met，由于第七位是 Leu，所以Phe为第八；由（4 ），第五为 Vai。所以八肽为： Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe 。
7?—个a螺旋片段含有180个氨基酸残基，该片段中有多少圈螺旋计算该 解答：180/=50圈，50 X =27nm该片段中含有 50圈螺旋，其轴长为 27nm。
&当一种四肽与 FDNB反应后，用LHCi水解得到DNP-Vai及其他3种氨基酸；当这四肽用胰蛋白酶水解 时发现两种碎片段；其中一片用 LiBH4 （下标）还原后再进行酸水解,水解液内有氨基乙醇和一种在浓硫酸条 件下能与乙醛酸反应产生紫（红）色产物的氨基酸。试问这四肽的一级结构是由哪几种氨基酸组成的
解答：（1）四肽与FDNB反应后，用LHCi水解得到DNP-Vai，证明N端为Vai。 （2） LiBH4还原后再水解，水解液中有氨基乙醇，证明肽的
C端为Giy。
说明此氨基酸为 Trp。说明C 端
a -螺旋片段的轴长。
（3） 水解液中有在浓 H2SQ条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产物的氨基酸，
为Giy — Trp…
（4） 根据胰蛋白酶的专一性，得知 N端片段为Vai — Arg （ Lys）…，以（1）、（2）、（ 3）结果可知道四肽
的顺序： N—Vai—Arg（Lys）— Trp—Giy—C。
9. 概述测定蛋白质一级结构的基本步骤。 解答：（1）测定蛋白质中氨基酸组成。 （ 2）蛋白质的 N 端和 C 端的测定。
（3） 应用两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂,各自得到一系列大小不同的肽 段。 （4） 分离提纯所产生的肽,并测定出它们的序列。
（5） 从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质中全部氨基酸排列顺序。
如果蛋白质含有一条以上的肽链,则需先拆开成单个肽链再按上述原则确定其一级结构。如是含二硫键的 蛋白质,也必须在测定其氨基酸排列顺序前,拆开二硫键,使肽链分开,并确定二硫键的位置。拆开二硫键可
用过甲酸氧化，使胱氨酸部分氧化成两个半胱氨磺酸。
生物化学简明教程课后习题及答案
